人TIMP-2蛋白在肝癌细胞迁移与侵袭中的作用-山东大学.PDFVIP

　第５４卷　第７期 山　东　大　学　学　报　（医　学　版） ２０１６年７月　 　Ｖｏｌ．５４　 Ｎｏ．７　　　　　ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＨＡＮＤＯＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＨＥＡＬＴＨＳＣＩＥＮＣＥＳ）　　　 　 Ｊｕｌ．２０１６　 　文章编号：１６７１－７５５４（２０１６）０７－００１１－０７　　　ＤＯＩ：１０．６０４０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７５５４．０．２０１６．１３２ 人ＴＩＭＰ２蛋白在肝癌细胞迁移与侵袭中的作用 １ １ ２ １ １ 王伟 ，曹煜姗 ，孙达权 ，黄小琼 ，徐国强 （贵州医科大学基础医学院１．生理学教研室；２．生物化学与分子生物学教研室，贵州 贵阳５５０００４） 摘要：目的　通过原核表达获取人 ＴＩＭＰ２蛋白，探讨 ＴＩＭＰ２在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法　以 ＳＭＭＣ７７２１肝癌细胞总ＲＮＡ为模板，用ＲＴＰＣＲ技术扩增出人ＴＩＭＰ２基因ｃＤＮＡ，通过基因重组技术构建原核 表达载体ｐＧＥＸＴＩＭＰ２并在大肠杆菌Ｏｒｉｇａｍｉ（ＤＥ３）中诱导表达人ＴＩＭＰ２重组蛋白。采用亲和层析法纯化表 达产物，并用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定；用ＲＮＡｉ技术和添加外源蛋白方法分析ＴＩＭＰ２蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的 作用；荧光定量ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ｓｉＲＮＡＴＩＭＰ２转染细胞后肝癌细胞内源性ＴＩＭＰ２的ｍＲＮＡ及蛋白 表达水平。结果　外源添加的ＴＩＭＰ２蛋白抑制肝癌细胞迁移及侵袭的能力，而ＲＮＡｉ技术能抑制内源的ＴＩＭＰ２ 蛋白增强肝癌细胞迁移及侵袭的能力；肝星状细胞的条件培养液能够促进肝癌细胞迁移和侵袭，而这种作用能够 被ＴＩＭＰ２蛋白抑制。结论　肝癌微环境中的ＴＩＭＰ２蛋白水平与肝癌细胞的迁移和浸润密切相关。 关键词：肝细胞癌；基质金属蛋白酶抑制剂２；转移；侵袭 中图分类号：Ｒ７３５．７　　　文献标志码：Ａ ＲｏｌｅｏｆｈｕｍａｎＴＩＭＰ２ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌ １ １ ２ １ １ ＷＡＮＧＷｅｉ，ＣＡＯＹｕｓｈａｎ，ＳＵＮＤａｑｕａｎ，ＨＵＡＮＧＸｉａｏｑｉｏｎｇ，ＸＵＧｕｏｑｉａｎｇ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ， ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｃｏｌｌｅｃｔｐｒｏｔｅｉｎｏｆｈｕｍａｎＴＩＭＰ２ｔｈｒｏｕｇｈｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｉｔｓ ｒｏｌｅｉｎｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＣＣ）ｃｅｌｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍ ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＳＭＭＣ７７２１，ａｎｄＴＩＭＰ２ｃＤＮＡｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＲＴＰＣＲ．Ｔｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｐＧＥＸＴＩＭＰ２ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＯｒｉｇａｍｉ（ＤＥ３）．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｌｐｒｏｄｕｃｔｗａｓｐｕｒｉ ｆｉｅｄｗｉｔｈａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｗｉｔｈＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＴｈｅｒｏｌｅｏｆＴＩＭＰ２ｉｎｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆ