常见的第7讲植物细胞培养生产代谢产物II.pptVIP

次级代谢产物（Secondary metabolites） 是通过次级代谢合成的产物，大多是分子结构比较复杂的小分子化合物，例如抗生素、激素、生物碱、毒素等。由于次级代谢产物大多具有生物活性，因此是植物代谢产物研究的重点。 细胞株和细胞系的区别 1 名词的由来： 细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”。 1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela系称为“株” 1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群 2 名词使用的现实情况 2．1 中学教材定义在人教版高中生物（选修）全一册第70页中， 细胞株被定义为经原代培养的组织细胞，培养到第10代左右，度过第一次死亡危机后的细胞群，这种细胞的遗传物质没有发生改变； 细胞系则被定义为可以度过第二次死亡危机，传代培养到40~50代的细胞，这部分细胞的遗传物质发生了部分改变并且细胞带有癌变的特点，这种细胞在适宜条件下无限传代。 2．2 文献定义由新鲜组织制成的细胞培养物称原代细胞，这种细胞经首次传代成功后的细胞称做细胞系，可泛指一般可能传代的细胞。 若用胰蛋白酶等将原代细胞消解分散后，再培养一代，称次代培养。 如果不能继续传代或传代有限，可称为“有限细胞系（finite cell line）”或“已建立的细胞系（established line）”。能够连续传代的细胞叫做“连续细胞系或无限细胞系（infinite cell line）”。 从一个经过生物学鉴定的细胞系或原代培养物用单细胞分离培养或通过筛选的方法，克隆具有特殊性质或标志的单细胞获得的细胞群，称细胞株。 3 比较不同观点得出的结论 3．1 矛盾性：人教版高中生物教材中细胞株和细胞系的概念内涵与文献中的概念内涵不同甚至完全相反。 人教版高中生物细胞株概念强调结束原代培养并可以进行传代培养的细胞群，并不强调细胞群的纯度；文献中的细胞株概念强调细胞群的纯度，认为细胞株是克隆的结果。人教版高中生物细胞系概念强调这些细胞已发生部分遗传物质的改变，带有癌变的可以传代培养的细胞群；文献中的细胞系概念强调细胞系是首次传代成功后的细胞群。 3．2 划分标准 人教版高中生物细胞系和细胞株定义以传代代数为标志区分，以遗传物质是否改变为标志； 专业文献中这两个概念与传代代数无关，遗传物质的改变与否并不做要求。细胞株强调细胞培养物中细胞成分单一性，所有的遗传、生化等特性完全相同； 细胞系不强调纯度，但应该有某一类细胞占绝大数。 3前体调控 前体指某一代谢中间体的 前一阶段的物质。乙酸、肉 桂酸（苯丙氨酸） 黄酮合成的前体物质 （二）两步法培养生产紫杉醇 ? 两步法培养 ? 第一步：细胞生长阶段 ? 第二步：产物积累阶段 （3）pH 会影响培养液的渗透压、酸碱度，酶的活性，从而 影响细胞代谢。 植物细胞液体培养的 pH 变化范围在 5－6 之间， 最佳的起始 pH在5.5－5.8 之间。如果对培养 液pH 进行控制，将有利于次级代谢产物的生成。 4.工程技术问题 （1）培养液的流变特性 由于植物细胞培养过程中容易结团，同时，不少细 胞在培养过程中容易分泌粘多糖等物质，从而使 传氧速率降低，影响细胞生长。 粘度变化可以由细胞本身或其分泌物等引起。前者 包括细胞浓度、年龄、大小、结团情况等。 （2）气体传递 与微生物不同，植物细胞培养一般需要光照，通过 光合作用合成有机物，因此氧气和CO2的含量与传 递对培养过程影响较大。 氧的传递与通气速率、培养液混合程度、培养液流 变特性、气液界面面积等因素有关；而氧的吸收 与反应器类型、细胞生长速率、温度、pH、营养 组成、细胞浓度等相关。 （3）搅拌与剪切力 为了加强气－液－固之间的传质，细胞悬浮培养时 需要混合搅动。 植物细胞虽然有较硬的细胞壁，但是细胞壁很脆弱 ，对搅拌的剪切力很敏感。由于剪切力比较大， 细胞会自溶，次级代谢产物合成会降低。 各种植物细胞耐受剪切力的能力不尽相同。烟草细 胞和长春花细胞在涡轮搅拌器转速150 rpm和 300 rpm时一般还能生长。培养桔叶鸡眼藤细胞 时，涡沦搅拌器的转速应低于 20 rpm。 剪切力影响的克服可以通过低剪切力的生物反应器 开发与耐受高剪切力的细胞株筛选来实现。 （4）泡沫与器壁表面粘附性 与微生物细胞培养相比，植物细胞培养过程中产生 的气泡更大，而且由于培养液含有蛋白质或粘多 糖，粘度大，细胞很容易被包埋在泡沫里，造成 非均相培养，也可从营养液中带出来，造成损失 或污染。因此，必须对泡沫进行消除。 消泡剂、机械去除。 （五）提高次级代谢产物产量的途径 培养设备：选择或设计