高三生物DNA粗提取与鉴定.pptVIP

（三）去除滤液中的杂质 　　为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。 讨论 　　此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ （三）去除滤液中的杂质 　　答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 　　为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。 讨论 　　此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 湖南长郡卫星远程学校 2009年下学期 制作 03 DNA的粗提取与鉴定 　　构成生物体的遗传物质是什么？ 讨论１： 　　构成生物体的遗传物质是什么？ 　　怎样才能将细胞内的遗传物质分离出来？ 讨论2： 讨论１： 基础知识 提取DNA的方法 提取DNA的方法 基础知识 1. 提取DNA的基本思路 　　利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 2. DNA的溶解性 　　DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反。 　　①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 　　①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 　　在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而　　　　　　　　逐渐降低; 在0.14 mol/L　　　　　　　　时，DNA溶解度最小；　　　　　　　　当NaCl溶液浓度继续增　　　　　　　　加时，DNA的溶解度又　　　　　　　　逐渐增大。 　　②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 0 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 　　②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 　　当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 3. DNA在酒精溶液中的溶解性 　　DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 4. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 5. DNA的鉴定 5. DNA的鉴定 ①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二笨胺可以作为鉴定DNA的试剂。 5. DNA的鉴定 ①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二笨胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ②甲基绿（蓝绿色） 　　通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。 原理总结 （一）实验材料的选取 实验设计 1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体中培养基的培养的大肠杆菌。（从中选取2~3种实验材料） 2.原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.动物细胞 　　动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 讨论 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 讨论 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 　　答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2. 植物细胞 讨论 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 讨论 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 　　答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2. 植物细胞 ②实例：　　提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 讨论