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鲑鱼降钙素前体多肽在毕赤酵母中的分泌表达_cropped 微生物药物与生物技术 鲑鱼降钙素前体多肽在毕赤酵母中的分泌表达 季 青,周祥山,张元兴 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237) 摘要:将鲑鱼降钙素前体多肽(sCTGly)基因克隆到表达载体pPIC9K上，然后转化毕赤酵母营养缺陷型菌株GS115，利用 -factorG418酿酒酵母分泌信号肽α将目的产物分泌到发酵上清液中。经组氨酸缺陷筛选、高拷贝筛选及摇瓶表达筛选， 获得较高水平表达菌株GS115-sCTGly。酶联免疫反应检测上清液中酶的活性，表明sCTGly产量在10mg/L以上。通过5L 发酵罐发酵条件优化，表达水平提高到200mg/L以上。 关键词:鲑鱼降钙素;前体;毕赤酵母;分泌表达 中图分类号: Q936 文献标识码: A 文章编号:1001-8255(2007)06-0411-05 Secreted Expression of Recombinant Salmon Calcitonin Precursor Peptide in Pichia pastoris JI Qing, ZHOU Xiang-shan, ZHANG Yuan-xing (State Key Lab. of Bioreactor Engineering, East China University of Science Technology, Shanghai 200237) ABSTRACT: A gene encoding salmon calcitonin precursor peptide (sCTGly) was cloned into vector pPIC9Kand transformated into the methylotrophic Pichia pastoris GS115. sCTGly was expressed and secreted into the culture using the Saccharomyces cerevisiae -mating factor as signal peptide. Through a series of single-clone screening for α + Hisphenotype, multiple-copy gene insertion and high expression level in shake flask, a strain named GS115-sCTGly with relatively satisfying target characters was obtained. The expression levels of sCTGly were calculated by detecting the activity of the peptide in cell-free supernatants with ELISA, and the yield of sCTGly was over 10mg/L in shake flask culture and could be increased to over 200mg/L by optimization of the fermentation conditions in 5L fermentor. Key Words: salmon calcitonin; precursor; Pichia pastoris; secreted expression 降钙素是由32个氨基酸组成的多肽激素，可通钙素。降钙素由Hirsh首次发现并证明它具有钙-磷[1][2]过抑制破骨细胞的活性来抑制骨质吸收。在人和 ，在治疗骨质疏松症、高血钙、甲 代谢调节功能 大鼠中，降钙素的前体是糖蛋白，通过蛋白酶裂解 状旁腺机能亢进、变形性骨炎及骨骼愈合等方面都 - 产生羧基端为甘氨酸的前体，再通过肽酰甘氨酸α显示了良好的疗效。现临床使用的降钙素主要是从 酰胺酶的作用，加工成羧基末端为酰胺基的成熟降 鲑鱼鳃和猪甲状腺中分离纯化的非人型的降钙素。 50鲑鱼降钙素的生物活性比人降钙素高倍左右，但 来源有限。国内外报道的通过基因工程手段表达降 收稿日期:2006-05-16 [3]钙素或其前体的研究所用的宿主包括大肠杆菌、 作者简介:季 青(1980)，男，硕士研究生，专业方向:蛋白表达 [4][5]-链霉菌、昆虫杆状病毒真核表达系统等，其 与纯化。 Tel大多数为融合表达或串联表达。考虑到融合和串 E-mail:ttt99118@联表达增加了纯化工艺的步骤、影响了收率，而昆 通讯联系人