VEB-3型与VEB-1型超广谱-内酰胺酶生化特性的比较.pdfVIP

VEB-3 型与VEB-1 型超广谱β- 内酰胺酶生化特性的比较 张哲 蒋晓飞 李敏 吕元 【摘要】 目的 研究 VEB-3 型超广谱β- 内酰胺酶（ESBL ）的生化特性，并与 VEB- 1 型 ESBL 进行比较。方法 将 blaVEB-3 和 blaVEB-1 基因连接至pET28a 载体上，并用重组质粒转 化大肠埃希菌BL21 进行克隆表达，分别挑选 blaVEB-3 或blaVEB-1 阳性表达的菌落测定β- 内 酰胺类抗生素对其最低抑菌浓度（MIC），同时提取酶蛋白进行等电点和酶动力学分析。 结果 VEB-3 和VEB- 1 型ESBL 具有基本一致MIC 和相同的等电点（pI 7.45 ），但两者的 酶动力学性质存在一定的差异：对头孢他啶和头孢噻肟，VEB-3 较 VEB- 1 表现出更高的亲 和力，两者 Km 相差一倍左右；对头孢噻吩，VEB- 1 比 VEB-3 更具亲和力；而对阿莫西 林，VEB- 1 型 ESBL 表现出很高的亲和力，而 VEB- 3 仅有低的亲和力，两者 Km 相差 20 多倍。 结论 VEB-3 和VEB- 1 型ESBL 具有相同的等电点，不同的动力学参数，blaVEB-1 基 因中Leu56 →Phe突变可能导致了两者酶动力学性