《第八章微生物遗传变异与菌种保藏(增加内容)》课件.pptVIP

三、营养缺陷型的筛选 （一）概念 （二）筛选方法 （一）概念 1. 三种遗传型个体 2、筛选用的培养基 1. 三种遗传型个体 （1）营养缺陷型（auxotroph）： 　　经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌株。 如：lys - ; bio - ; （2）野生型(wild type)： 　　自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷突　　变前的原始菌株，为该微生物的野生型。 　　　　如：lys+;bio+; （3）原养型 (prototroph) ： 指auxo突变菌株回复突变或重组后产生的菌株，与野生型的表型相同。 2、筛选用的培养基 1）基本培养基（minimal medium,MM）[-]： 满足野生型菌株营养要求最低成分的组合。 2）完全培养基（complete medium,CM）[+]： 满足一切auxo生长的天然或半组合培养基。 3）补充培养基（supplemented medium,SM） [x]： 　　　　在MM中有针对性地加入一或几种营养成分　　　　以满足相应 auxo生长的组合培养基。 （二）筛选方法 1、诱变处理 2、 auxo的浓缩 3、auxo的检出 4、auxo的鉴定 5、auxo的应用 1. 诱变处理（同前) auxo的筛选程序： 　　　　　细菌培养 ? 离心洗涤 ? 诱变处理 　　　? CM后培养 ? 洗涤 ? MM加PN ? 　　　涂布于CM平板 ? 影印培养 ?　挑取 ? 　　　鉴定 ? 菌种保存。 2. auxo的浓缩： （1）抗生素法： 1）原理：青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生长着的　　　　　　微生物细胞，对休止态细胞无作用。 2）方法：菌培养在含抗生素的MM基中。 （2）菌丝过滤法： 1）适用于丝状（放线菌、霉菌） 2）原理：基本培养基上只有发育成菌丝；auxo孢子可　　　　　　通过滤膜，野生型菌丝不能通过。 （3）差别杀菌法：基本培养基上只有野生型生长，加热杀　　　　　死野生型营养体，保留auxo芽孢。细菌—80℃ 　　　　　酵母——60 ℃ 适用于产芽孢、孢子菌。 3. auxo的检出 （1）逐个检出法 （2）影印平板培养法 （3）限量补充法 （在mm中加0.01%蛋白胨， 　　　　　　　　auxo菌落小，野生型大） （4）夹层培养法 4. auxo的鉴定 （1）生长谱法 1）方法简便； 2）回变和污染不影响结果 3）测定物质可为粉末或纸片 （2）混合氨基酸（Vit）法 　　混合氨基酸法步骤： 　1）将多种营养因子编组，如： 　　2）将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养 　　3）结果分析 　　　4）营养因子分组编排时注意： 　　　　A、每组内无重复的营养因子 　　　　B、每组中应包含只出现一次的因子 　　　　　C、每组中其他因子应分别出现二次 一组：1 2 3 4 5 二组：2 6 7 8 9 三组：3 7 10 11 12 四组：4 8 11 13 14 五组：5 9 12 14 15 5. auxo 的应用 （1）作为标记菌株： 　进行基因工程、诱变育种、代谢过程的研究中的亲本标记； （2）作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种； （3）作为aa、维生素、碱基的测定菌株。 第二节 基因重组 一、原核生物的基因重组 二、真核生物的基因重组 基因重组 把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经遗传物质重新组合后，形成新遗传型个体的方式。 　　　　基因重组——分子水平的杂交 　　　　一般杂交——细胞水平 如： 甲 乙 生长快、产量低 生长慢、产量高 ? 基因重组 ? 生长快、产量高 一、原核生物的基因重组 （一）转化（transformation) （二）转导(transduction) （三）接合(conjugation) （四）原生质体融合（protoplast fusion） （一）转化（transformation) 概念—— 受体细胞(receptor)直接吸收了来自供体细胞(donor)的DNA片断，并把它整合到自己的基