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煤焦油洗剂治疗银屑病的药效学研究.doc
煤焦油洗剂治疗银屑病的药效学研宄
【 】目的:探讨煤焦油洗剂治疗银屑病的药效学机 制。方法:采用小鼠尾鳞片表皮、鼠阴道上皮实验模型,观 察其对上皮细胞分裂及表皮细胞分化的影响;采用豚鼠磷 酸组织胺致痒阈模型,观察其抑制瘙痒的作用;采用角叉 菜致大鼠足跖肿胀模型,观察其抗炎作用。结果煤焦油洗 剂有显著的抑制小鼠阴道上皮细胞有丝分裂及增殖细胞核 抗原表达、促进小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的作用,能显 著提高磷酸组织胺对豚鼠的致痒阈,使角叉菜胶所致大鼠 足跖肿胀显著减轻。结论:煤焦油洗剂有抑制角质形成细胞 增殖、促进角质形成细胞正常分化、明显抑制瘙痒和急性 炎症的作用。
【关键词】煤焦油洗剂;药效学;银屑病
煤焦油洗剂主要成分为煤焦油,适用于银屑病、神经 性皮炎、脂溢性皮炎、脂溢性脱发、头皮屑过多等皮肤 病,临床疗效良好。为探讨煤焦油洗剂的药效学机制,笔 者对煤焦油洗剂进行了与治疗银屑病相关的药效学研宄, 现报告如下。
1材料和方法
材料:Wist ar种大白鼠,体重2 00g±20g;昆明种小 白鼠,体重20g±2g;白色豚鼠,体重300g±20g;阴道上
皮模型用雌性小鼠,鼠尾鳞片模型用雄性小鼠。以上动物 由山东鲁抗医药股份有限公司动物中心提供,清洁级动物, 普通饲料喂养,动物室温度2023 °C,许可证号SCXK (鲁)XX0017。1%、2%及4%煤焦油洗剂均为自制,复方蒽林 软膏为武汉爱民制药有限公司生产,PC NA单克隆抗体由美 国NeoMarkers公司生产,SP试剂盒由北京中山生物技术有 限公司生产。
方法。
对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响[1]:取雌性小鼠 30只,腹腔注射乙烯雌,/只,1次/d,连续3天。第4天 将小鼠随机分成5组(n=6),以生理盐水作为阴性对照、复 方蒽林软膏作为阳性对照,分别于上午8时阴道灌注1%、2% 及4%煤焦油洗剂、复方蒽林软膏、生理盐水各。上午10时 给每组小鼠腹腔注射秋水仙碱2mg/kg,并分别再做与前相 同的阴道灌注。6h后处死小鼠,切取阴道组织,作常规组 织切片,HE染色,在光镜下计数50 0个小鼠阴道基底细胞 中所出现的有丝分裂数,换算成每100个基底细胞的有丝 分裂数(分裂指数)。
对小鼠阴道上皮细胞PC NA的影响[1]:取雌性小鼠30 只随机分成5组(n=6),分别做与前相同的雌化及阴道灌注, 但不注射秋水仙碱,末次给药后6 h处死小鼠,切取阴道组 织,作常规石蜡切片,经抗原修复、山羊血清工作液孵育,
加入1 :100的一抗、室温lh,滴加二抗工作液,辣根过氧 化物酶一链霉素卵白素工作液37 °C孵育30min。每步骤间 均用的PBS冲洗3次。用新配制的D ABH 20 2显色。
其中以淋巴结为阳性对照,以PBS缓冲液替代一抗作阴性 对照。光镜下观察PCNA阳性表达率。PCNA的染色阳性物质 呈棕黄色颗粒,主要位于细胞核。采用Garcia半定量分级 法[2]:观察10个高倍视野,细胞核棕黄色反应为阳性。
①阳性反应着色深度:多数细胞核浅着色为1,深着色边界 清楚为2。②阳性着色细胞比例:50%为3级。以上两项相 加:2 为(+),3 为(2+),>4 为(3+)。
对小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的影响[2]:取30只雄性 小鼠随机分成5组(n=6),分别以1%、2%及4 %煤焦油洗剂、 复方蒽林软膏、生理盐水各涂抹尾部,2次/d,连续涂药 20天后处死小鼠,取鼠尾根部13c m表皮,常规组织切片, HE染色,光镜下观察,凡是一个鱗片有连续成行的颗粒层 细胞者,判定为有颗粒层形成的鳞片,计数每100个鳞片 中有颗粒层的鳞片数(A)。
对角叉菜致大鼠足跖肿胀的影响[3]:取Wi star大鼠, 雌雄各半,随机分为5组(n -6),分别以1%、2%及4%煤焦 油洗剂、复方蒽林软膏、生理盐水各涂抹每鼠右后肢足跖, 2次/d,连续给药5日。末次给药后lh,每鼠右后肢足跖皮 下注射1 °%角叉菜混悬液/只致炎,以千分尺测量右后足趾
致炎后、1、3、5h的厚度,计算各组大鼠足趾肿胀率:肿 胀率=(致炎后足跖厚度一致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚 度 X 100%。
对豚鼠磷酸组织胺致痒阈的影响[4]:取豚鼠,雌雄各 半,随机分为5组(n=6),分别以1%、2%及4 %煤焦油洗齐IJ、 复方蒽林软膏、生理盐水各涂抹每鼠每只豚鼠右后足背,2 次/d,连续给药5日。末次给药后2小时,每只豚鼠右后 足背剃毛,并用粗砂纸擦伤剃脱毛处表皮面积约lcm 2。
10分钟后开始在创面滴以°%磷酸组织胺溶液/只。此后每隔 3min滴一次,每次/只,依°%、°%、%、%……递增浓度, 至出现豚鼠回头舔右后足时所给予的总量即为致痒阈。
2结果
实验结果见表1、2、3、4、5。各浓度的煤焦油洗剂 与阴性对照组相比,
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