独活寄生汤抑制软骨细胞凋亡的机制-研究.pdf

4讨论 23 4．1独活奇生汤浓疗骨关节炎的中医理论． 23 4．2软竹细胞内胍『叫应激凋■模型的建立． 24 4．3独活寄生汤对TM诱导软骨细胞内质|_{：9应激凋亡通路的影响……………．．24 4．4独活寄生汤对TM诱导软骨细胞miR一34a表达的影响……………………26 5小结……………………………………………………………………………27 实验三独活寄生汤对硝普钠诱导软骨细胞线粒体凋亡的影响……28 目的………………………………………………………………………………28 1实验材料………………………………………………………………………28 2实验方法与步骤………………………………………………………………29 ：．I独活寄生汤水提物的制备…………………………………………………．29 2．2M丁r优化$NP诱导软骨细胞凋亡的量效关系……………………………29 2．3SNP诱导软骨细胞凋亡模型的复制………………………………………30 2．4独活寄生汤干预SNP诱导软骨细胞凋亡模型的方法……………………．．30 ：．5独活寄生汤对软骨细胞线粒体凋亡模型影响的检测……………．…………30 2．6统计学处理………………………………………………………………36 3结果……………………………………………………………………………36 3．1SNP诱导软骨细胞凋亡的量效关系………………………………………．．36 3．2SNP诱导凋亡后软骨细胞的形态观察……………………………………37 3．3独活寄生汤干预SNP诱导软骨细胞凋亡模型的效应关系…………………37 3．4独活寄生汤干预后各组软骨细胞相关基因及蛋白表达……………………．40 4i刁‘{仓…．…………………………………………………………………………………………………42 4．1软骨细胞线粒体凋亡模型的建立…………………………………………42 4．2独活寄生汤对SNP诱导软骨细胞凋亡率的影响……………………………43 4．3独活寄生汤列SNP诱导软骨细胞△、}Jm的影响……………………………43 4．4独活罱生汤对SNP诱导软骨细胞线粒体凋亡通路的影响…………………44 5小结……………………………………………………………………………………………………．45 结j沧………………………………………………………………………………46 参考文献……………………………………………………………47 致谢………………………………………………………………一54 文献综述……………………………………………………………55 个人简历……………………■……………………………………59 HI 万方数据 中文摘要 目的 探讨独活寄生汤抑制软骨细胞凋亡的作用机制。 方法 1．清洁级4周龄SD大鼠，采用机械．酶消化法获取膝关节软骨细胞，进行体外培 养，倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构，II型胶原免疫组织化学及甲苯胺蓝染色 鉴定软骨细胞，MTT描绘第2代软骨细胞生长曲线。 2．采用不同浓度的衣霉素分别干预第2代软骨细胞24h，MTT筛选衣霉素较佳作 用浓度，倒置相差显微镜观察诱导后软骨细胞的形态结构，建立软骨细胞内质网应激凋 亡模型；MTT优化独活寄生汤干预软骨细胞内质网应激凋亡模型的浓度及时问；以内 质网应激抑制剂4一苯基丁酸钠盐为阳性对照，倒置相差