刚果嗜皮菌选择性分离方法的-研究与盘羊分离株的分离鉴定.pdfVIP

摘 要 刚果嗜皮菌（Dermatophilus Congolensis ），属于放线菌目（Actinomycetales ）嗜皮 菌科（ ）嗜皮菌属（ ）的成员。可通过皮肤感染而引起多 Dermatophilaceae Dermatophilus 种动物以及人的一种急性或慢性皮肤性传染病，以浅表性渗出、脓包性皮疹或结节为主 要临床特征。动物感染后可引起生产力以及抗病力下降，绵羊感染后可导致羊毛品质及 皮革质量降低，羔羊消瘦及死亡，OIE 将本病列为 B 类疫病。 由于刚果嗜皮菌在生长过程中存在孢子期和菌丝期的特性，并且在从病变皮肤中分 离时常受到杂菌污染而难以获得纯培养菌，因此建立一种高效、有效的刚果嗜皮菌的分 离方法一直是国内外学者关注的技术问题。 本研究以分离纯化并鉴定的刚果嗜皮菌绵羊株和发病盘羊病变皮肤为试验材料，采 用平板涂抹的方法，研究病料样品的不同的预处理方法、培养基、增菌活化剂、杂菌抑 制剂对刚果嗜皮菌的分离效果的影响，以期建立一种用于实验室分离纯化刚果嗜皮菌的 高效简便的方法，并在此基础上，对发病盘羊皮肤病料进行刚果嗜皮菌的分离，并对刚 果嗜皮菌盘羊分离株进行菌落与形态学鉴定、家兔人感染试验、PCR 鉴定及 RAPD 分 析。 结果如下： 1、皮肤病料在无菌蒸馏水室温静置浸泡 15 天后，取上清接种于 pH7.0 6%酵母膏 活化液中，60℃培养 30min，再涂于绵羊血液琼脂平板，37℃培养 48h ，可获得较多的 刚果嗜皮菌典型菌落。菌落经染色镜检，可观察到呈不规则状及少量的圆形孢子。而采 用将病料悬液经 37℃水浴 1h、烛罐处理 15min 均未分离到目地菌；0.05%SDS 及 蛋白胨的活化液对病料中的刚果嗜皮菌无活化作用。 酵母膏的最佳活 0.05%SDS 6% 6% 化温度为 60℃ 30min ；刚果嗜皮菌在高氏Ⅰ号培养基上生长不良，在普通营养琼脂培养 上不生长，在 LB 琼脂培养基上的生长情况不如绵羊血液琼脂；常用于放线菌分离培养 中防止杂菌生长的孔雀石绿和重铬酸钾抑菌剂，在本试验中无明显抑制杂菌生长的作 用，不适合作为刚果嗜皮菌分离培养的选择性抑菌剂。本试验所建立的刚果嗜皮菌分离 纯化方法可为动物与人类嗜皮菌病的病原学研究提供有用的技术手段。 2 、采用本研究建立的刚果嗜皮菌分离方法，从发病盘羊皮肤病料中分离获得刚果 嗜皮菌（盘羊株），经培养特性、菌体染色与形态特性、PCR 检测、分离株间接免疫酶 染色鉴定，以及家兔感染试验均与绵羊分离株相同。说明来自同一地区发病的刚果嗜皮 菌绵羊和盘羊分离株的某些生物学特性基本一致。 、对刚果嗜皮菌绵羊株和盘羊株的 进行随机引物扩增多态性 （ ） 3 DNA DNA RAPD 分析，扩增产物有一定的多态性，根据欧氏遗传距离公式计算出遗传距离为 0.6667，显 示盘羊株与绵羊株的基因组 DNA 有不同程度的差异。 关键词：刚果嗜皮菌；选择性分离方法；RAPD I Abstract Dermatophilus congolensis is a member of Actinomycetales ,Dermatophilaceae, Dermatophilus . Caused the diseases of an acute or chronic on a variety of animal and human by the skin contanct. With superficial exudative pustule rash or nodules as the main clinical featur