靶向化布鲁氏菌树突状细胞疫苗的试制的-研究.pdf

III I I UI ㈩IIII I III I I III Y1 摘要 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患传染病。布鲁氏菌主要经由粘膜和 伤口感染，能够引起家畜的自发性流产和人的“波浪热”。大量资料显示，布鲁氏菌的 易感细胞是巨噬细胞，该细胞感染布鲁氏菌后，在其胞内大量繁殖，使其抗原提呈能 力丧失，从而使宿主的免疫功能破坏而引发持续性感染。因此，如何帮助患病动物建 立有效的免疫应答机制是当前研究的热点。 树突状细胞(dendriticcell，DC)是迄今为止发现的体内功能最强的专职抗原提呈 细胞。适应性免疫应答的启动需要DC的抗原提呈。DC不仅能刺激已活化或记忆性 的T细胞，而且能显著刺激初始T细胞的增殖，它触发的是点放射状放大反应，1个 中有着巨大的魅力。本实验围绕DC进行疫苗研究，并在动物试验中检验实验疫苗的 免疫效果。 membrane 研究表明，布鲁氏菌的外膜蛋fj(Outer 性。本实验采用去污剂连续抽提法提取了布鲁氏菌的全外膜蛋白，经SDS．PAGE电 泳后，选择了抗原表位和糖基化位点较多的37．5kD与47．2kD的蛋白作为疫苗抗原 候选蛋白，经过分离、电洗脱纯化得到这两种布鲁氏菌OMPs。采用a．D．甘露吡喃异 硫氰酸苯酯对这两种蛋白质抗原进行甘露糖修饰，以靶向体内抗原提呈功能最强的专 职抗原提呈细胞一树突状细胞，再经间苯二酚．硫酸法鉴定两种蛋白质抗原糖基修饰 效果。 采取方差分析比较布鲁氏菌外膜蛋白糖基修饰后的免疫效果，以血清中抗体水平 与淋巴细胞增殖能力作为检测指标，随机选取20只小鼠，并随机分成A、B、C和D 四组，分别肌注布鲁氏菌S2商品疫苗、纯化的布鲁氏菌两种混合外膜蛋白、甘露糖 异极显著(尸0．01)，具有统计学意义，表明布鲁氏菌S2商品疫苗、布鲁氏菌两种 混合外膜蛋白、修饰化的布鲁氏菌外膜蛋白免疫小鼠后，血清抗体水平均显著高于阴 性对照组，明显诱导了机体的体液免疫应答。由淋巴细胞增殖试验表明：C组内的实 验组OD值／对照组OD值明显高于A组、B组、D组。说明小鼠免疫甘露糖修饰化 的布鲁氏菌外膜蛋白在二免lOd后，T淋巴细胞增殖能力明显高于免疫布鲁氏菌S2 商品疫苗、纯化的布鲁氏菌两种混合外膜蛋白与PBS对照组。表明甘露糖修饰化的 布鲁氏菌外膜蛋白在诱导机体的细胞免疫应答发挥了作用。以上实验结果证实蛋白质 经糖基化修饰后有显著免疫效果。 疫苗佐剂的选择直接影响着疫苗的免疫效果，为了使疫苗的效果达到最佳，选择 ISA 206 71VG、ESSAIISA 了法国赛比克公司的四种佐剂Montanide IMS251CVG和MontanideGel01PR，利用糖基化布鲁氏菌OMPs制作了四种不同 佐剂的疫苗。由正交试验筛选布鲁氏菌外膜蛋白的配合佐剂，最佳免疫程序。结果显 IMS251C 原使用Montanide VG纳米颗粒佐剂，免疫剂量为甘露糖基化修饰 氏菌外膜蛋白Xigg，采取肌内注射，免疫三次这种组合，无论是在抗体产生 是血清IFN吖产生水平为最佳组合。 全随机试验、腹腔巨噬细胞吞噬试验进一步检验靶向化布鲁氏菌树突状细胞疫 效果，结果表明靶向化疫苗诱导了机体较强的免疫应答。安全性试验结果表明： 布鲁氏菌外膜蛋白树突状细胞疫苗对6～8周龄BALB／c健康小鼠、妊娠小鼠均 研究的实验结果为基于疫苗研究策略，有效预防布鲁氏病奠定了基础。 ：布鲁氏菌；树突状细胞；甘露糖受体；靶向化 Researchand of DendriticCells DevelopmentTargeted 场ccineforB