不同亚型神经细胞粘附分子重组质粒的构建与鉴定.pdf

㈣舢fjIlf 837 不同亚型神经细胞粘附分子重组质粒的构建及鉴定 摘 要 Cell Adhesion MarrowStormal 取总RNA，甲醛琼脂糖凝胶电泳鉴定和紫外分光光度法测定后，以提取的 内切酶Xba NCAM．140eDNA和NCAM．1 I、 HindIII酶切位点之间，纯化回收连接产物。3．用氯化钙制备感受态大肠杆 素的阳性培养基中大量扩增。取一部分扩增的大肠杆菌DH5a提取各亚型 I、HindlII双酶切鉴定。结果：1．提取的成年小 DNA做限制性内切酶Xba 鼠大脑皮质总RNA经甲醛琼脂糖凝胶电泳可见1 功制备感受态大肠杆菌DH5a后，限制性内切酶XbaI、HindlII双酶切 白质粒转入大肠杆菌DH5a，接种到含有氨苄青霉素的固体培养基中培养， 生长良好，见大量菌斑。4．挑取氨苄青霉素阳性培养基中单克隆大肠杆菌 DH5a菌落，接种于含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜。 取菌液提取三种NCAM亚型重组质粒及空白质粒，以提取的质粒为模板， 醛琼脂糖凝胶电泳后空白质粒组未见明显条带，而重组质粒组分别得到 I、HindlII酶切空 2178bp、2547bp和3348bp的片段，限制性内切酶Xba 白质粒及重组质粒后，琼脂糖凝胶电泳分别得到单条带5100bp、及双条带 建的pcDNA4-NCAM．120、pcDNA4一NCAM．1 80重 组质 和N RecombinantPlasmidof ofThe ConstructionAndIdentification MoleculeGene Different NeuralCellAdhesion Hypotype vector therecombinant construct plasmid by Abstract：Objective：To forthe ofthe research recombination variability gene technologypreparation MarrowStorm oftheBone thatthetreateffect Cell(BMSC)diferenthypotype Adhesion cord ofNeuralCell Molecule(NCAM)forspinal threedifferent ofNCAM cDNA ofthe hypotype byRT-PCR，then fragment the