SELE技术及其在肿瘤诊治中的应用进展　.docVIP

SELEX技术及其在肿瘤诊治中的应用进展 】指数式扩增配体的系统进化 (Systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichmen tSELEX)技术是一类新的体外组合化学筛选技术，通过它能 获得高效地与多靶物质特异性结合的单链或双链寡核苷酸 适配子(aptamer)，目前已广泛应用于肿瘤的诊断与治疗中。 SELEX技术获得的适配子与蛋白质类抗体相比具有多种优势， 展现出了在肿瘤诊断和治疗方面的极大潜能。本文主要就 SELEX技术在肿瘤诊断和治疗两方面的应用进展作一综述。 关键词】SE LEX技术；核酸适配子；肿瘤诊断；肿 瘤治疗 指数式扩增配体的系统进化技术(Sy stematicevo lutionofli g andsbyexp on entialen ric hment, S ELEX ) 是一项由E lling tong和Tuerk[l，2]在20世纪90年代初 建立的体外组合化学筛选技术，由其获得的核酸适配子 (aptam er),是一段具有明确三级构象的短的单链或双链寡 核苷酸序列，即D N A(ssDNA、d sD NA)或RNA。核酸适配子 的出现，改变了人们对核酸只能做遗传物质的传统认识， 利用核酸结构的多样性，可使核酸适配子高效、特异地结 合各种与之空间构象互补的粑分子。利用SELEX技术筛选 获得适配子识别靶分子的模式与抗体类似，但与蛋白质类 抗体相比，核酸类适配子具有更多的优越性，如结合力强、 亲和力高、特异性好、库容量大、靶分子范围广等［3 ］。这 些特性使得核酸适配子在疾病的诊断与治疗领域成为更为 有效的工具。 1SELEX技术的基本原理 SELEX过程包括以下几个步骤［4 ］:①构建文库：在体 外人工构建一个含有101 2?1015个随机寡核苷列文库，随 机寡核苷酸片段的长度一般为20?40bp ;②筛选、分离： 在适宜条件下，使随机单链寡核苷酸序列与靶分子相互作用, 分离出与靶分子特异结合的寡核苷酸序列；③扩增：PCR扩 增特异结合的寡核苷酸适配子，用作新一轮筛选。以上三 步构成一轮完整的SELEX过程。重复筛选、分离、扩增的循 环步骤5?15轮，特异性适配子不断得到富集，最后得到 高特异性、高亲和力的适配子。 2SELEX技术在肿瘤诊治中的应用 虽然抗体是目前应用于人类肿瘤诊治过程中进行分子 识别的主要物质，但是核酸适配子表现出的高敏感性、低 毒性、低免疫原性和小分子量等优势［5］，弥补了抗体在诊 断领域中的不足，使得核酸适配子可以代替其成为理想的 肿瘤诊断和治疗试剂。 SELEX技术在肿瘤诊断中的作用 由S ELEX筛选技术得到的核酸适配子因为其便于进行 化学修饰和二、三级折叠构象改变的特点，常与其他技术 结合，应用于肿瘤标志物的检测。 体内肿瘤分子成像 肌腱蛋白-C(tenascin -C，TN-C)是肿瘤组织基质中表 达的一种胞外蛋白，在肿瘤生长中过度表达。Hie ke等［6］ 以TN-C高表达的U251神经胶质母细胞瘤细胞系为靶标，通 过S ELE X技术筛选得到能够与TN-C特异结合的核酸适体 TTA1，将其用放射性同位素99mT c标记，注射到种植了人 胶质母细胞瘤和乳腺癌的裸鼠模型体内，检测Te nascin-C , 通过二维闪烁成像能获得清晰的肿瘤图像。研究表明， TTA1能被肿瘤组织快速摄取并滞留较长的时间，而在血液 和其他非靶标组织中却被迅速清除，这一特点使之非常适 用于肿瘤的影像诊断［7］。 肿瘤相关蛋白检测 随着SELEX技术的发展，越来越多能与细胞外、细胞膜 上、细胞内肿瘤相关蛋白靶向结合的具有抗肿瘤特性的核 酸适配子已经应用于临床肿瘤诊断中［8］。其中与肿瘤相关 膜抗原特异性结合的适配子应用更为广泛、成熟。 前列腺特异性膜抗原 前列腺特异性膜抗原(PS MA)是一种只在前列腺癌细 胞表面高表达而在正常细胞表面不表达的高特异性膜结合 蛋白，因此成为检测前列腺肿瘤细胞的标志物。Lupoid［9 ］ 等人利用SELEX技术筛选出两种适配子A 9和A10来阻断纯 化的胞外PSMA结构域。这是首次报道RNA适配子能与肿瘤 相关的膜抗原特异性结合。Ch u［10 ］等把该种核酸适配子 连接到发光纳米晶体上，发现这种结合物能与过表达PSM A 的固定细胞及活体细胞特异性结合，可作为前列腺癌的诊 断试剂。 MUC1 MUC1是一种在多种人类肿瘤细胞，尤其是腺癌细胞表 面高表达的糖蛋白。M UC1分布在血流中并己成为膀胱癌的 肿瘤标志物。Fe rreir a［ll］等人利用S ELEX技术筛选出一 种能与之结合的D NA适配子，而在随后的试验中，这种适 配子又表现出对乳腺、直肠、肺、胰腺肿瘤细胞的特异性 结合能力。Xiang ［1