高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移周明.docVIP

高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移 周明莉，杨佳佳，唐石伏，杨 丽，张海龙，杜燕娥，文思阳，柳满然（400016重庆，重庆医科大学检验医学院，临床检验诊断学教育部重点实验室） 【摘要】目的 在人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因，研究其对MCF-7干细胞特性的细胞的影响。方法 构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist，HEK293T细胞包装逆转录病毒，并感染MCF-7细胞，通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞，再通过长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺细胞小球(Mammosphere)，并通过Western blot法检测myc-Twist及Twist诱导后富集的Mammosphere相关CSC蛋白标记的表达，Transwell?法检测细胞的迁移能力。结果 成功构建逆转录病毒质粒pBABE-puro-myc-Twist；Twist基因在靶细胞内稳定表达；长程无血清悬浮培养富集出具有干细胞特性的Mammosphere； MCF-7/Twist细胞肿瘤干细胞样细胞富集能力增强(P0.05)； myc-Twist、Twist及SOX2、OCT4蛋白在MCF-7/Twist Mammosphere细胞中表达上调；MCF-7/Twist Mammosphere细胞迁移能