《基因治疗基础》课件.pptVIP

基 础 基因治疗现状 自杀基因疗法 药物敏感基因 Pre-drug Cytoxic-drug 胸苷激酶 (tk，单纯疱疹病毒 HSV；水痘疱疹病毒 VZV) 胞嘧啶脱氨酶 (CD，大肠杆菌EC) HSV-tK GCV GCVTP EC-CD 5-FC 5-FU 谢 谢 图1-1 腺病毒表达载体构建流程 endocytosis 1. 将野生型的结构基因gag、pol和env 删除，由外源基因取代 2. 至少含有两种外源基因，一种是标记 基因供阳性筛选用，另一种是待转移的治疗基因 3. 两种基因受同一个启动子调控 4. 保存有野生型病毒的包装信号? 5. Gag的翻译起始密码子突变为终止密码子，防止重组产生gag蛋白质 cysteine 半胱氨酸 其中，癌症居基因治疗的首位。预计2004年，世界上第一个用于治疗癌症的基因治疗产品将进入市场。 温度敏感性多聚物 可通过使多聚物膨胀缩小的温度变化来控制DNA的释放，如生物可降解的 PEG – poly(D,L-lactic acid-co-glycolic acid)(PLGA) 为非离子亲水三联多聚物，呈温度依赖性溶液-凝胶态转换。在室温（4-20℃）为液状，而在体温（30℃）则转换成凝胶状。因而在体外易于与质粒DNA形成多聚物溶液，而进入体内后即在注射部位转换成水凝胶，缓慢释放质粒DNA，从而延长转染时间 整合 用鲑鱼基因组中的转位子Tc1 /mariner 超家族成员的非功能性的序列，重建一个古老的转位子Sleeping Beauty，成为可用于脊椎动物的首个有功能的转位子，已成功用于将目的基因在成年小鼠体细胞染色体的稳定整合。最近又报告了一些噬菌体整合酶及其相应的识别组分，能介导对哺乳细胞染色体的作用。 （二） 重组病毒法 野生型病毒 致病 基因工程改造 删除某些复制必需基因和非必需基因 导入包装病毒 必需的基因 病毒载体质粒(插入外源基因) 包装细胞 (提供包装功能) 重组病毒颗粒 治疗 具有正常外壳糖蛋白，与野生型病毒相同的感染能力，携带外源基因，可在靶细胞表达目的蛋白，缺乏某些必需基因，不能复制和包装出新的病毒颗粒 感染细胞 重组病毒 病毒介导基因内转移（Viral mediated transfer） 是通过病毒为载体（vector），将外源基因通过重组技术与病毒重组，然后去感染受体细胞。图： 病毒载体 逆转录病毒载体（8.5kb） 腺病毒载体 （6kb） 腺相关病毒载体 （5kb） 常用病毒载体的主要生物学特性 病毒载体 主要生物学特性 逆转录病毒载体 只感染分裂期细胞；能整合入染色体基因组 可激活癌基因或灭活正常基因 腺病毒载体 能感染分裂期或非分裂期细胞； 不发生整合作用，免疫原性强 AAV病毒载体 可感染分裂期或非分裂期细胞； 能整合入基因组；免疫原性弱； 易感染骨骼肌、心肌、肝和视网膜 HSV病毒载体 可感染分裂期和非分裂期细胞； 包装容量较大；嗜神经性， 可经轴突反向导入神经组织 其他病毒载体 1．牛痘病毒（vaccinia virus，VV）载体 主要优点是载体较易构建，插入外源基因的大小和数量没有限制，而且绝对安全。由于牛痘是良好的免疫原，因而特别适用于免疫治疗。但免疫原性也可使其重复使用成为问题。 2．基于HIV的载体（HIV-based vector） 治疗爱滋病具有独特优势：1）具有与HIV病毒同样的T细胞靶向性，可介导治疗基因进入感染的细胞，直接抑制病毒复制；2）在靶细胞内可因野生型HIV的作用而被激活，使载体扩增，更有效地发挥作用。当然，HIV载体的安全性是一个尚待解决的问题 3．EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）的衍生载体 已知唯一在体外可高效感染B淋巴细胞并使之永生化的病毒。 1、逆转录病毒（retrovirus） 目前应用最多的最成功的是逆转录病毒，病毒感染细胞后，