《第0章多肽与蛋白质》-课件.ppt

五、利用蛋白质颗粒沉降行为不同可进行超速离心分离 超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。 蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。 因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 六、用化学或反向遗传学方法可分析或演绎多肽链的氨基酸序列 分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成（离子交换层析） 测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基 把肽链水解成片段，分别进行分析 测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法 一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。 化学法 溶解法 二硝基氟苯法（DNP法） 肼解法 二甲基氨基萘磺酰氯法（Dansyl-氯法）还原成氨基醇法 亮氨酸氨肽酶法 细胞外氨肽酶法 羧肽酶A法 羧肽酶B法 羧肽酶C法 氨基酸和肽的末端测定法 通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列： 按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列 分离编码蛋白质的基因 测定DNA序列 排列出mRNA序列 七、应用物理学、生物信息学原理可进行蛋白质空间结构测定或预测 通常采用圆二色光谱(circular dichroism，CD)测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量。 ?-螺旋的CD峰有222nm处的负峰、208nm处的负峰和198nm处的正峰3个成分；而?-折叠的CD谱不很固定。 （一）圆二色光谱可估算蛋白质二级结构比例 X射线衍射法(X-ray diffraction)和核磁共振技术(nuclear magnetic resonance, NMR)是研究蛋白质三维空间结构最准确的方法。 （二）X射线衍射法和核磁共振技术用于 三维空间结构分析 * 用分子力学、分子动力学的方法，根据物理化学的基本原理，从理论上计算蛋白质分子的空间结构。 （三）根据蛋白质的氨基酸序列预测三维空间 结构 * 通过对已知空间结构的蛋白质进行分析，找出一级结构与空间结构的关系，总结出规律，用于新的蛋白质空间结构的预测。 第六节 血浆蛋白质 Plasma Proteins 一、采用电泳法可将血浆蛋白质分成若干组分 电泳法是分离、分析血浆蛋白质的主要方法。采用醋酸纤维素膜电泳，可将血浆蛋白质分为5个组分。 按泳动快慢依次为：清蛋白、α1-、α2-、β-和γ-球蛋白（globulin）。而采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)可将血浆蛋白分离出100种以上。 A ? ? 白蛋白 ?1 ?2 ? ? 血浆蛋白的电泳图 血浆蛋白质主要成分及功能 功 能 血浆蛋白质 抗蛋白酶 抗凝乳蛋白酶、α1-抗胰蛋白酶、α2-巨球蛋白、抗凝血酶 血液凝固 各种凝血因子、纤维蛋白原 酶 血液中功能酶：如凝血因子、胆碱酯酶 组织细胞漏出的酶：如转氨酶 激素 红细胞生成素 免疫功能 γ-免疫球蛋白、补体蛋白、β2-微球蛋白 参与炎症反应 急性时相反应蛋白：如C反应蛋白、α1-酸性糖蛋白（血清类黏蛋白） 肿瘤胚胎性蛋白 α1甲胎蛋白（AFP） 转运或结合蛋白 清蛋白——结合、运输胆红素、非酯化脂肪酸、离子（Ca2＋），金属离子（Cu2＋、Zn2＋）、正铁血红素、类固醇激素和各种药物分子 血浆铜蓝蛋白——含有Cu2＋（但Cu2＋转运可能主要依赖清蛋白） 皮质类固醇结合球蛋白（运皮质激素蛋白）——结合皮质醇 结合珠蛋白——结合细胞外的血红蛋白 脂蛋白（乳糜微粒、VLDL、LDL、HDL）——运输甘油三酯、胆固醇、磷脂等 血红素结合蛋白——结合血红素 视黄醇结合蛋白——结合视黄醇 性激素结合球蛋白——结合睾酮、雌二醇 甲状腺素结合球蛋白——结合T3、T4 运铁蛋白——运输铁 甲状腺素运载蛋白——结合T4并与视黄醇结合蛋白形成复合物 二、血浆中大多数蛋白质具有特殊的 生物学功能 （一）血浆蛋白质大多数属于分泌性蛋白质 （二）清蛋白是血浆中含量最多的蛋白质 （三）很多血浆蛋白具有特殊的结合功能 （三）很多血浆蛋白具有特殊的结合功能 1．前清蛋白运输视黄醇 2．运铁蛋白是铁的转运载体 3．甲状腺素结合球蛋白运输甲状腺素 4．结合珠蛋白-血红蛋白复合物可防止血红 蛋白在肾小管沉积 5．血浆铜蓝蛋白可结合铜 6．免疫球蛋白与机体的防御机制 血红蛋