《干旱胁迫对小麦幼苗生理生化指标的影响》-毕业论文.docVIP

精品 干旱胁迫对小麦幼苗生理生化指标的影响 摘要：以小麦幼苗为试验材料，研究了干旱胁迫对其幼苗生理生化指标的影响。试验结果表明：在干旱胁迫下除发芽率下降外，小麦幼苗的脯氨酸、MDA、过氧化氢、抗氧化酶（PPO、POD）、GSH的含量都较正常情况下小麦幼苗的含量多。 关键词：干旱胁迫 小麦幼苗 生理生化指标 引言：小麦是我国北方地区的主要粮食作物，但是近几年随着气候的变化，小麦产量安全问题日益突出。小麦的生长不仅受到自身遗传物质的控制，还受到众多环境因子的影响，如光、温、水和土壤营养物质等，而小麦生育后期干旱常常是限制我国北方地区小麦生长和发育的两个主要环境胁迫因子。干旱对小麦的生理、生化都产生重要的影响，进而影响小麦的生长发育、产量和品质。因此，为了减小环境对小麦生产的影响，有必要从小麦的各项生理生化指标含量的变化，来研究干旱胁迫对小麦的影响，从而找到合适的方法来解决干旱胁迫问题，解决小麦生产安全问题提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料及处理 将吸胀12小时的小麦种子在有湿润滤纸的白磁盘培养基中生长7天，7天后将其中一部分幼苗干旱生长5天，5天后用相同的方法分别对实验组和对照组的小麦进行脯氨酸、MDA、过氧化氢、抗氧化酶（PPO、POD）、GSH的含量的测定。 1.2测定方法[1] 1.21小麦种子发芽率的测定 各取50粒吸胀的小麦种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验：其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴 20 min） 另50个半粒进行曙红染色（室温染色10 min） 根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。 1.22小麦幼苗脯氨酸含量的测定 分别取0.5 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 测定：上清液各2 mL →分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂→煮沸15 min→冷却后→5000 rpm离心10 min →分别测定A520, 将测得的结果用公式 Pro content = 计算出正常和干旱生长小麦的胚芽鞘的脯氨酸含量。 MDH含量的测定 分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 mL 50mM PBS (pH=7.8)和少许石英砂→充分研磨→用2 mL PBS洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 测定：分别取上清液各2 mL →加入0.6%TBA（用0.6% TCA配制） 2 mL→煮沸12 min→冷却后→5000 rpm离心10 min →分别测定OD450和OD532 将测得的D450和OD450的数据带入下列公式 OD450=C1x 85.4 OD450 =C2X15000计算出C1可溶性糖的浓度，C2MDA的浓度。 1.24 H2O2测定 分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 mL 50 mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)和少许石英砂→充分研磨→用2 mL PBS洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。 测定：分别取上清液各3 mL →加入0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v) H2SO4配制] 1 mL→摇匀→ 5000 rpm离心10 min → OD410 将测得的OD410值带入下列公式 H2O2 content = （?mmol.g-1FW）计算出H2O2酶的含量。 1.25过氧化酶的测定 1、分别取0.5 g实验材料→加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨　→转入离心管中→用2 ml提取液洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。 2、POD测定：取POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）3.00 ml，加入酶液100 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应3 min时的A470。 3、PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.8 ml，加入酶液0.2 ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应 2 min时的A410。 将测得的A470和A410数据带入公式 POD activities=（umol.g-1FW） PPO activies=(U.g-1FW) 计算出PPO和POD的值 1.26GSH的测定 分别取0.5 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充