第八章--代生物技术在抗生素工业中的应用.ppt

第八章 现代生物技术在抗生素工业中的应用周浓副教授重庆三峡学院生命科学与工程学院;;; 抗生素、氨基酸、核苷酸、维生素等;产业规模大;传统育种方法与现代生物技术在制药工业中的比较;诱变育种;现代生物技术：理性化育种;新观点：系统代谢工程改造菌种;大量引进国外高产菌株;现代生物技术改造传统制药工业;现代生物技术改造传统制药工业;现代生物技术改造传统制药工业;背 景;第一节 重组DNA技术在抗生素生产中的应用;　　抗生素生物合成并非单一基因的直接产物，而是由初级代谢产物经过一系列酶催化产生的次级代谢产物，其形成过程是一个复杂的、多因素调节的过程 　　传统的提高微生物产生抗生素能力的方法主要是用诱变剂（如紫外线、化学诱变剂等）处理微生物，获得生产能力较高的突变株。80年代，人们开始将DNA重组技术应用于次级代谢产物的生物合成上；通过生物合成酶基因的分离、质粒的选择、基因重组与转移、宿主表达等方面。;传统发酵法的弊端：采用经典方法育种，盲目性高，无法集合不同菌株的优良性状。基因重组技术的优点：可以定向改造菌种，且能集多个菌株的多种优良性状于同一菌株，达到简化工艺、提高产品质量和产量的目的。;一、克隆抗生素生物合成基因的方法;2.克隆抗生素生物合成基因的方法;1.阻断变株法;Tetracenomycin C (tam C);2.突变克隆法;3.直接克隆法;头霉素C基因的克隆;根据抗生素生物合成基因和抗性基因是连锁的，表达上也是协同的，而且抗性基因比较小（1-2kb），容易检测和克隆。;红霉素生物合成基因的克隆;5.寡核苷酸探针法;6.同源基因杂交法;7.在标准宿主系统中克隆检测单基因产物;digestion;抗生素基因簇的组成;PABA合成酶基因——pab的克隆;克隆抗生素所用的方法;二、几种典型的抗生素生物合成基因的结构; ;;按硫代模板机制进行。ACV合酶合成δ-氨基己二酸-半胱氨酸-D-缬氨酸三肽。由IPN合酶催化形成异青霉素N。 ;青霉素和头孢菌素的生物合成;三、提高抗生素产量的方法;提高抗生素产量;原理：在克隆菌株中，增加某一与产量有关的基因（限速阶段的基因或正调节基因）剂量，使产量提高。;抗生素合成途径中的某个阶段可能是整个合成中的限速阶段，识别位于合成途径中的“限速瓶颈”，并设法倒入能提高这个阶段酶系的基因拷贝数，就有可能增加最终抗生素的产量。故增加生物合成中限速阶段酶基因剂量有可能提高抗生素产量。 抗生素合成途径中的代谢支路的关键基因消除，提高红霉素合成流量;;开源：强化红霉素合成甲基丙二酰CoA代谢节点;节流：克拉维酸合成中3-磷酸甘油醛脱氢酶编码基因敲除;;依据 在许多链霉菌中，调节基因嵌在控制抗生素产生的基因簇中 正调节基因对结构基因进行正向调节 负调节基因对结构基因进行负向调节 将额外的正调节基因引入野生型菌株中，使获得高产产物的最简单的方法 增加正性调节基因或降低负性调节基因也是增加抗生素产量的方法;红霉素合成调节基因bldD的发现;美伐他汀合成调节基因mlcR的强化表达; 事实依据 1、抗生素的生产水平是由抗生素生物合成酶和对自身抗性的酶所共同决定的 2、抗性基因经常和生物合成基因连锁，是激活生物合成基因基因转录的必需成分 3、抗性基因必需先转录，建立抗性后，生物合成基因的转录才能进行 所以可以通过提高菌种自身的抗性水平来改良菌种，提高抗生素产量。 ;链霉素抗性筛选法在选育博来霉素A2组分高产菌株中的应用;四、改善抗生素组分;;;红霉素基因工程技术现状;A（76.8% ）;红霉素生物合成途径的复杂性;1 丙酸 ＋ 6 甲基丙二酸;围绕红霉素菌种改造的工作 ;几种基因操作后获得的不同突变株情况汇总;基因工程菌发酵;五、改进抗生素生产工艺;透明颤菌血红蛋白基因在产黄青霉中的克隆与表达;六、产生杂合抗生素;1.基因重组 ;2.酶基因突变;3.引入酶基因;4.酶催化形成新产物;组合生物合成操作策略;红霉素的组合生物合成;;红霉素组合生物合成：新化合物;必特螺旋霉素简介;必特螺旋霉素结构 ;第二节 基因工程技术在新药研究中的应用;靶酶;受体;第三节 细胞工程在传统制药工业中的应用;;;抗生素类药物总结一、定义 ;抗生素;抗感染药物;化疗提出者：保罗.恩利希（德国，1911）;;如果说，原子弹是第