免疫自动化仪器分析幻灯片医学课件.ppt

自动化免疫仪器种类（应用技术） 免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术 * . 荧光免疫自动化 利用荧光物质标记抗原抗体的一种检测方法 由免疫反应、荧光及计算机技术联合应用的技术 主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定 * . 荧光免疫自动化 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）：AG-AB结合，某些荧光物质发长寿命荧光，时间分辨技术 利用长寿命荧光物质（镧氏元素铕螯合物）标记抗原或抗体，测定过程中，可利用延迟时间来消除非特异性的荧光干扰（图） 。 * . 光强度 激发 短寿命荧光 长寿命荧光 延迟时间 测量时间 铕螯合物的激发、发射光谱 * . 荧光免疫自动化 TRFIA设计中的一些注意事项： Stakes位移（图） 解离增强 * . 荧光免疫自动化 荧光偏振免疫测定：以小分子物质与大分子物质的旋转差异而使它们对偏振光的吸收不同为依据检测小分子药物 荧光酶免疫分析：标记酶参与反应 * . 波长 300 400 500 600 700 Stakes 吸光度 Stakes 位移示意图 激发光 荧光 * . 自动化免疫仪器种类（应用技术） 免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术 * . 流式细胞仪 流式细胞仪（FCM）是以激光为光源，检测生物学颗粒理化性质的仪器 生物学颗粒包括免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细胞、染色体、真核细胞等 理化性质则为细胞大小、形状、胞浆颗粒、DNA含量、酶活性等 * . 流式细胞仪 FCM综合了激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学及计算机技术，被称为实验室“CT” FCM现正广泛应用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学、临床检验学等 * . 免疫自动化仪器分析 * . 概论 早期免疫分析通过观察沉淀物形成，凝集及溶血现象发生来分析，如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等 上世纪50年代末60年代初，利用AG-AB复合物形成使浊度改变，再用比浊计来比浊，但因其敏感性差未被接受 70年代初，开始有自动检测系统，但因其用的是激光为光源，固定波长，灵敏度较低，而且时间一般要2—3小时 * . 概论 70年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的革命的发展 随着标记技术的发展，免疫化学可以纳入临床化学检验范畴 如今，自动化免疫分析系统更加飞速发展 自动化免疫分析的基础是抗原抗体的结合，具有高特异性；手段多是利用标记技术而将检测信号放大，具有高灵敏度 * . 自动化免疫仪器种类（应用技术） 免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术 * . 免疫比浊 利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法 此法准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的检测手段 比浊法与比色法 * . 散射免疫比浊分析法 基本原理：抗原抗体复合物对一定波长的光产生折射、偏转，偏转角度及散射光强度与复合物粒子的大小和量有关（图） Rayleigh散射（图） Mile散射 Heidelberger曲线 * . 定时散射比浊分析 基本原理：免疫沉淀反应和散射比浊分析结合之技术，反应分两个阶段，预反应阶段和反应阶段（图） 保证抗原不过量的方法： 确保反应体系抗体过量 对抗原过量进行阈值限定 * . 预反应阶段 5ul样本 抗原过剩区 阈值 信号 反 应 阶 段 45ul样本 7.5秒 2分钟 6分钟（2+4分钟） 定时散射比浊反应曲线图 抗原不过量 抗原过量 * . 速率散射比浊分析 基本原理：抗原抗体结合反应的一种动态测定法，适时检测抗原抗体复合物形成的散射光信号 最快反应时间（图） 抗原过量检测（图） * . 抗原浓度递增 散射光峰值 峰值信号与抗原抗体反应之间的关系图 A B C D F G H I * . 反应时间（秒） 0 60 85 散射率 抗体过量 抗原过量 第二峰值信号 抗原量检测速率峰值信号产生 * . 免疫透射比浊 基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前方夹角为0℃（图），保持抗体过量，形成可溶性AG-AB复合物，使介质浊度发生改变。 实验要求： 选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要大、数量要多，反应时间充分。 * . 单色器 透 射 比 浊 计 散射 比浊计 散射比浊和透射比浊的区别示意图 θ 透射光 散射光 散射光 * . 胶乳浊度测定法 基本原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀一致