转录因子ZBTB20对小鼠垂体发育的调节作用与其机制-研究.pdf

目 录 一、摘要……………………………………………………………………．6 (一)中文摘要……………………………………………………………．6 (二)英文摘要……………………………………………………………．8 二、正文…………………………………………………………………．．10 (一)略缩词表……………………………………………………………。10 (--)前言…………………………………………………………………．11 (三)材料和方法…………………………………………………………．15 (四)结果…………………………………………………………………24 1、ZBTB20在正常垂体组织中表达的时空特征…………………………24 2、ZBTB20基因全身敲除小鼠垂体相关表型分析……………………．．25 (1)ZBTB20基因全身敲除小鼠的繁殖和鉴定………………………．．25 (2)垂体外观及内分泌细胞分布的改变……………………………．26 (3)垂体靶腺的改变…………………………………………………．．30 3、ZBTB20基因全身敲除小鼠垂体发育不全的机制探讨………………34 (五)讨论………………………………………………………………．37 (六)参考文献……………………………………………………………39 三、综述…………………………………………………………………．41 四、攻读学位期间发表文章情况…………………………………………48 五、致谢…………………………………………………………………49 转录因子ZBTB20对垂体发育的调节作用及机制的研究 中文摘要 垂体是神经内分泌系统的重要组成部分，是下丘脑和外周靶器官之间的枢纽， 在维持内环境稳定、生长发育、物质代谢和哺乳等方面都发挥重要作用。垂体的 发育是一个高度复杂和精确调控的过程，多条信号通路和多个转录因子按不同时 空顺序激活或表达，任何环节出现问题都可导致垂体发育不全及相应的内分泌激 素缺失。近年来，通过对基因敲除小鼠和基因突变的人类家系的研究，己发现多 个与垂体发育相关的转录因子，对垂体发育过程的调控也有了一定认识，但垂体 发育的分子机制尚未完全阐明(1制。该领域的研究进展和突破将丰富人们对垂体 发育过程和功能调节的认识，可望为垂体相关疾病的诊治提供新的方向和手段。 锌指蛋白ZBTB20是BTB锌指蛋白家族成员，又名树突状细胞来源的POZ zinc 锌指蛋白(Dendriticcell—derivedPOZ finger，DPZF)。它由741个编码氨基 酸组成，N端含有POZ结构域(通常介导蛋白问的相互作用)，C端含有5个 泛表达，已知的生理功能包括：参与肝脏中甲胎蛋白基因的表达调控；参与海马 组织的正常发育；参与胰腺B细胞的功能调控(8‘9)。尽管ZBTB20分子的结构保守， 功能重要，但人们对其在体内的生理功能以及作用机制的认识十分有限。 鼠模型，通过组织学和分子生物学等方法，研究了ZBTB20对小鼠垂体发育的影 响以及可能的机制。结果显示，ZBTB20蛋白在正常小鼠的垂体细胞中的表达始 于胚胎第14．5天(E14．5)，至E16．5表达丰度己接近成年，并在整个生命周期中 都有较高丰度的表达。Zbtb20乒小鼠腺垂体的体积明显减小，其中催乳素细胞群 hormone， 缺失，检测不到催乳素(prolactin，PRL)的表达，生长激素(growth GH)表达减少约一半。通过对靶腺的表型分析我们发现，Zbtb20-／-小鼠的腺垂体 发育不全主要影响生长发育，表现为体形减小，体重减轻；乳腺发育，表现为腺 管延伸障碍和腺泡发育不全：以及性腺发育不全。进一步的机制研究发现劢舾20 基因敲除后，胚胎期腺垂体中仍可分化出GH／PRL双阳性的前体细胞，但这一前 体细胞无法继续分化出PRL单阳性的终末分化细胞。 本课题证实了ZBTB20是调控垂体发育过程的重要转录因子之一，它的缺失 可以导致腺垂体发育不全。ZBTB20在腺垂体中的作用主要是控制催乳素细胞群 的终末分化过程，该基因在垂体中的缺失导致GH／PRL双阳性前体细胞向PRL 单阳性终末细胞的分化出现障碍。 关键词：ZBTB20；垂体发育；基因敲除；转