蛋白质工程-课件.ppt

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
研究细胞中能与某一蛋白结合的所有未知蛋白质:实验的关键是得到细胞中含有靶蛋白的复合体,经过有效地分离纯化后,逐一鉴定复合物中的各个组分; 或者采用一对多的筛选方法,如酵母双杂交,在建立的蛋白表达文库中检测可能与靶蛋白相互作用的蛋白质。 方法:酵母双杂交、串联亲和纯化、质谱鉴定、蛋白质芯片以及基于生物信息学的分析方法等。 蛋白质组学研究的途径 组成蛋白质组学研究:类似基因组学的研究,力图“查清”基因组编码的所有蛋白质,建立蛋白质组数据库; 比较蛋白质组学研究:着重于寻找和筛选引起2个样本之间的差异蛋白质谱产生的任何有意义的因素,揭示细胞生理和病理状态的进程与本质,对外界环境刺激的反应途径,以及细胞调控机制,同时获得对某些关键蛋白的定性和功能分析。 蛋白质组学的产生与发展 基因组时代 →后基因组时代 1996年澳大利亚建立了世界上第一个蛋白质组研究中心(APAF)。 美国国立癌症研究院(NCI)投资建立肺、直肠、乳腺、卵巢肿瘤的蛋白质组数据库,NCI和FDA共同投资建立癌症不同阶段的蛋白质组数据库。 英国建立三个蛋白质组研究中心对已完成或即将完成全基因组测序的生物体进行蛋白质组研究。 1998年我国启动了蛋白质组学研究, 2003成立了中国蛋白质组学专业学术委员会和中国人类蛋白质组组织(CHHUPO),我国在鼻咽癌、白血病、肝癌和肺癌蛋白质组研究方面取得了较大的进展。 蛋白质组学的发展趋势 在基础研究方面:蛋白质组研究技术已被应用到各种生命科学领域,如细胞生物学、神经生物学等,涉及到各种重要的生物学现象,如信号转导、细胞分化、蛋白质折叠等等。 在应用研究方面:蛋白质组学将成为寻找疾病分子标记和药物靶标最有效的方法之一。 在技术发展方面:蛋白质组学的研究方法将出现多种技术并存,各有优势和局限的特点,而难以象基因组研究一样形成比较一致的方法。除了发展新方法外,更强调各种方法间的整合和互补,以适应不同蛋白质的不同特征。另外,蛋白质组学与其它学科的交叉也将日益显著和重要,这种交叉是新技术新方法的活水之源,特别是,蛋白质组学与其它大规模科学如基因组学,生物信息学等领域的交叉,所呈现出的系统生物学(System Biology)研究模式,将成为未来生命科学最令人激动的新前沿。 蛋白质组学面临的挑战 蛋白质组学采用一系列技术方法来对蛋白质进行大规模鉴定,目前没有一种技术能适用于所有的应用,不同的技术有各自的优缺点。如何把这些方法进行整合并实现自动化是一个巨大的挑战,我们必须克服从样品制备到数据库管理的每一个分析阶段的重要障碍。 灵敏度是一个主要问题,那些丰度较低的蛋白质总是很难测定到。 一些主要技术也有很高比例的假阳性和假阴性。 目前蛋白质组学所使用的许多技术仍然是原始的。期待将来有更好的材料、仪器设计和方法学可以提高灵敏度、分辨率和重复性。 样品制备 膜蛋白的制备 功能失活 蛋白质降解 样品污染 分离和鉴定 低丰度蛋白的检测 膜蛋白的检测 蛋白质染色的动态范围 重复性 具有极端值pI蛋白质的分离 生物信息学 各种不同的数据和来源 鉴定数据库内不存在的蛋白质 点识别算法 限制因素和瓶颈 二、蛋白质组学研究方法 发展高通量、高灵敏度、高准确性的研究技术平台是现在乃至相当一段时间内蛋白质组学研究中的主要任务。 蛋白质组学的研究技术 蛋白质分离技术: 凝胶双向电泳、HPLC; 蛋白质鉴定技术: Edman 测序、质谱技术; 图像分析与生物信息:图像分析软件,数据库; 相互作用研究技术:酵母双杂交技术、免疫共沉淀、蛋白质芯片等。 蛋白质组表达模式的研究方法 研究蛋白质组的组成成分:支撑技术主要有双向凝胶电泳、以质谱为代表的蛋白质鉴定技术及生物信息学分析。 蛋白质组研究中的样品制备 样品的预分级:蛋白质溶解性、电荷特性等; 蛋白质的细胞和细胞器定位:膜蛋白、核蛋白线粒体、高尔基体、叶绿体等); 组织水平上蛋白质组样品制备:激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)可直接在显微镜下从组织切片中精确分离特定的细胞(群)。 双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis,2-DE):利用蛋白质的等电点和分子量,结合凝胶化学特性,分离各种蛋白质的方法。 蛋白质组研究中的样品分离 蛋白质组研究中的样品分析鉴定 质谱:样品分子离子化后, 按离子的质荷比(M/Z)的差异分离,据此可确定分子量与序列。 蛋白质组功能模式的研究方法 目标:揭示蛋白质组成员间的相互作用、相互协调的关系,并深入了解蛋白质的结构与功能的相互关系,以及基因结构与蛋白质结构功能的关系。 蛋白质翻译后修饰的研究(糖基化、磷酸化、乙酰化、二硫键)。 蛋白质相互作用研究技术(酵母双杂交、亲和层析耦联质谱技术 、免疫共沉淀耦联质

文档评论(0)

xiaohuer + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档