2018年布鲁克液质联用操作规程.docxVIP

啦啦啦 啊啊啊 布鲁克液质联用仪操作规程 1操作前检查 1.1 检查液氮罐和高纯氮的出口压力，保证在正常范围 1.2检查洗针溶液和流动相 1.3 流动相须现配并超声，缓冲盐溶液过0.22μm微孔滤膜（或者使用色谱纯的盐溶液和酸溶液） 1.4 如使用溶融石英进样管，操作前应检查石英管是否拉长，确保其未超出ESI探针尖端。 1.5 检查系统真空度，电离真空计读数（分析仪区域）应小于5×10-6 Torr。 1.6 检查废液液位，及时清空废液。 1.7 检查液氮罐和氦气钢瓶是否有一定压力，以便为测试样品提供符合流速 和压力要求的氮气（喷雾气体和干燥气体）和氦气（碰撞气体）。 2操作步骤及注意事项 1．检查并打开干燥气 (Dry gas) 和雾化气 (Nebulizer Gas)所需的氮气源； 1) 如配备液氮罐，则需打开增压阀及供气阀阀门， 使罐体压力保持在100 psi 以上，并调节减压阀出气口压力至 0.6 Mpa； 2) 如配备氮气发生器，则提前半小时打开氮气发生器电源，以便使氮气能够达到99.99%以上的纯度，再调节氮气流量至 20 L/min； 2．检查并打开碰撞气 (Collision Gas) 高纯氮气N2或高纯氩气Ar钢瓶（纯度要求99.999%），并调节减压阀出气口压力至 0.4 Mpa； 3．检查机械泵泵油的水平线， 需在小窗口的 1/2～2/3 之间； 4．打开计算机，显示器电源； 5．打开质谱仪主机电源（仪器左侧最下方）； 6．启动 micrOTOFcontrol 控制软件，务必保持仪器一直处在shutdown状态，待真空度达到 ≤1×10e-6mbar后，才可切换至standby状态待机；为了保证良好稳定的实验结果，待真空度下降至 10e-7mbar以下后，再operate仪器开始测试。 2.2 新建液相方法 打开hystar软件，选择method，然后输入新建方法的名字，点击open，开始方法的新建。在弹出的对话框中选择edit，然后点击“wizard”进行设置。液相方法包括梯度、流速、柱温、样品盘温度、时间、进样针吸样速度等，可依次设置即可，全部设置好之后，将。 2.3 新建质谱方法 方法一： 在otofcontrol中，打开method，按照自己待检测物的分子量范围及正负偏向性选择合适的质谱方法，小分子有对应的small molecular方法，蛋白质组有专门的proteomics方法。 方法二（非专业人员不推荐）： 在otofcontrol中，打开method，选择new，即可新建质谱方法。可以修改的参数包括以下几个方面： （1）mode中的Focus为active，line spectra calculation为use sum intensity，ion polarity 为pos或neg，mass range调到待检测物合适的分子量范围。 （2）source中capillary pos：4500V，neg：3500。Divert valve：source1-2进质谱；source1-6为discard to fluid （3）Tune中collision RF 小分子调到1000-1500，大分子调到2000-2500；low mass视目标物分子量大小截留（例如目标分子为500，可调为300，去掉小分子区域的杂峰）。 （4）MS/MS中如果想检测二级，可以勾选auto MS/MS；precursor ions中 cycle time 正常下为3s （5）chromatogram中选择BPC 根据待检测物的分子量大小和正负偏向性，先在软件自带的质谱方法中选择相应的方法，再在此方法的基础上进行优化及分段（如含盐的样品截掉前2-5分钟，1-6 waste）。 仪器在操作状态下Operation 稳定 20-30 分钟后即可开始仪器质量准确度校正。 2.4仪器质量准确度校正 2.2.1. 药物和酶解多肽样品，选用甲酸钠溶液作为校正标准液。覆盖质量范围m/z 90-1200；校正模式选用 Enhanced Quadratic。 2.2.2. 蛋白质类样品选用三氟乙酸钠溶液作为校正标准液。覆盖质量范围m/z 200-2000；校正模式选用 Quadratic。 2.2.3. 校正液配制 甲酸钠校正液： 溶剂：异丙醇:水溶液= 1:1 并含有 0.2%甲酸 10mM 甲酸钠校正液： 1ml 1M NaOH + 99ml 溶剂 三氟乙酸钠校正液： 溶剂： 50%乙氰含有 0.1%三氟乙酸钠(TFA) 2.2.3. Calibration 校正界面 3.测样方式 3.1 直接进样测定 对于标准品或相对较纯或混合组分较少并且不含盐的药物样品， 如果仅需要进行鉴定，可以采用直接进样方法测定。 3.1.1 样品用标