《流式凋亡和周期检测-读书报告》-精选课件.pptVIP

流式细胞术特点 流式应用常见范围 细胞大小 颗粒度 细胞表面分子：CD 系列 细胞浆内分子：胞内细胞因子 细胞核内分子：P53 细胞功能检测：细胞周期、凋亡 细胞分选： CSC分选 周期检测 样品制备 细胞： 六孔板 八成满足够 组织： 胰酶消化 300目筛网 约1X106 PBS漂洗两次 70%酒精4℃固定过夜（次日上机检测） -20℃固定 一月内检测、样品多、 不能同时收集 周期试剂盒-染色步骤 50μL PI（0.1mg/ml） 凋亡检测 样品制备 细胞 六孔板 八成满足够 注意：培养液中的悬浮细胞一起收集 组织 胰酶消化+300目筛网 样品处理步骤 冰盒中 运送 对照组设置 实验分组 同型对照 免疫荧光标记中的阴性对照 未标记单抗 用来设定十字门的位置（R3区98%-99%） 未设置同型对照出现的问题 补偿不足导致 分群不佳 周期图分析 凋亡图分析 Annexin- PI双染法 Annexin 磷脂酰丝氨酸 PI DNA 左上为细胞碎片 右上为晚期凋亡细胞 左下为活细胞 右下为早期凋亡细胞 CD分子标记图 R1 CD24+/CD44- R2 CD24+/CD44+ R3 CD24- /CD44- R4 CD24- /CD44+ SP检测 R1 ----Hoechst33342+维拉帕米 R2 ----Hoechst33342 相关实验室 细胞凋亡和周期-- 学校先知楼6楼 王玲老师 细胞周期—医院中心实验室-传染病房5楼 杨海伟老师 * * 在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选 PBS 漂洗两次 1000rpm 离心5 min 0.5ml PBS 悬浮细胞 混匀，室温 静止5分钟 上机检测 2.5μL RNase A( 10μg/μL) 37℃消化1hr Annexin V-FITC 5μL混匀 Binding Buffer 500μL 悬浮细胞 PBS洗两遍 培养液 悬浮细胞 Propidium Iodide 5μL混匀 上机检测 避光反应 5～15min *