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羊水细胞培养用于产前诊断878例剖析 　　摘要：目的 分析孕中期行产前诊断孕妇羊水细胞染色体核型，探讨羊水染色体检查对诊断胎儿染色体病的临床意义。方法 对878例孕中期具有产前诊断指征的孕妇行羊膜腔穿刺术抽羊水进行细胞培养、G显带技术及染色体核型分析。结果 成功分析的878例羊水标本，检出异常核型15例（1.71%），其中数目异常9例，占异常核型的60.00%；结构异常6例，在异常核型中占40.00%；检出正常变异染色体81例（9.21%）。结论 产前诊断是防止异常染色体儿出生的有效手段，有利于降低出生缺陷率、提高出生人口素质生命质量。 　　关键词：羊水细胞；染色体异常；染色体核型分析；产前诊断 　　降低出生缺陷提高出生人口素质是卫生部门的长期工作目标，当前，羊膜腔穿刺术仍然是应用最广泛而且准确的产前诊断方法。收集羊水中的胎儿上皮脱落细胞进行培养，从而获得胎儿染色体中期分裂相，进行核型分析，是防止染色体病患儿出生的有效手段。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 2013年1月～2014年2月来我院围产保健科门诊及遗传咨询门诊就诊的具有产前诊断指征的孕妇879例，年龄18～44岁，孕龄18～22+6w，其中产前筛查高风险551例，高龄孕妇298例，其余30例（不良孕产史12例，彩超提示胎儿畸形16例，先天愚型孕妇1例），孕妇要求行羊膜腔穿刺术1例。 　　1.2方法 　　1.2.1采样 在常规无菌条件下行羊膜腔穿刺术，B超引导下进行穿刺，最初的1～2ml羊水弃去，随后抽取羊水20ml，注入2支15ml无菌离心管中（每支10ml）离心。 　　1.2.2接种 羊水标本以2100r/min离心后弃上清液，加羊水培养基（AmnioMAX-Ⅱ）5ml于离心管中混匀后移入羊水培养瓶中，后置于5%CO2，37℃培养，按卫生部产前诊断行业标准（WS322《胎儿染色体异常与开放性神经管缺陷的产前筛查与诊断技术标准》）要求分别采用两套培养系统进行培养与制片。 　　1.2.3收获 培养7d后观察细胞生长情况，视情况换液，当培养瓶中有9～16个细胞克隆贴壁生长，且细胞克隆中有较多大、园、折光性强的分裂细胞时，加秋水仙素后继续培养2～4h再进行收获。 　　1.2.4制片 经过低浓度胰酶短时消化、刮细胞、离心、低渗、固定等步骤，将获得的沉淀制成细胞悬液，湿冰片滴片，每瓶培养物分开制片编号，经过75℃烤片3h、G显带。 　　1.2.5分析 每例标本选择形态适中、显带清楚、带数320条以上的核型分析6个，计数20个核型，如遇有疑问的标本则需增加分析和计数的分裂相数。本实验室从实验到核型分析均分两组，由两人进行，两组分析878例羊水染色体结果均一致。 　　2 结果 　　2.1共采集标本879例，培养成功878例，培养成功率达99.89%。在成功培养的878例羊水染色体分析中，核型为46，XY451例（51.37%），46，XX427例（48.63%），检出染色体异常15例，占受检人数的1.71%（15/878），染色体数目异常9例（60%），其中常染色体数目异常8例，分别为21三体6例，18三体1例，13三体1例；性染色体数目异常1例，核型为47，XYY；染色体结构异常6例（40%），其中罗伯逊易位3例，其他平衡易位3例；正常变异染色体81例（9.21%），其中inv（9）12例；D、G组染色体的短臂和随体增加共46例；1、9、16号染色体异染色质区增加共18例；Y染色体长臂增加5例。 　　2.2行羊膜腔穿刺术的879例孕妇，有1例孕妇术后1d出现下腹疼痛，因及时就诊，未发生流产。术后均未发生感染、胎盘早剥、阴道流血、胎膜早破、羊水栓塞及胎儿损伤等并发症。 　　3 讨论 　　3.1羊膜腔穿刺术在产前诊断中的应用 在产前及时、安全、准确地诊断胎儿遗传病，有利于医务人员和孕妇共同协商、选择恰当的处理方案。产前诊断的方法很多，包括细胞遗传学、生化遗传学以及分子遗传学等。其中通过羊膜腔穿刺、培养羊水细胞、进行核型分析的细胞遗传学方法诊断胎儿染色体核型异常，是目前临床上使用最广泛的一种方法。羊膜腔穿刺羊水细胞培养是当前细胞遗传产前诊断的金标准[1]。 　　羊膜腔穿刺是一种通过B超引导，经腹部穿刺羊膜腔收集羊水的方法。我们在实际工作中深刻地体会到，只要严格遵循操作规范，积极探索操作方法，运用羊膜腔穿刺开展产前诊断具有非常高的临床价值。 　　羊膜腔穿刺作为一种创伤性诊断方法，其对母亲和胎儿的影响是导致孕妇及其家属焦虑的主要原因。据文献报道，孕中期羊膜腔穿刺的流产率在0.5%～1%[2]。为了减轻创伤，我们严格控制操作指征，努力预防感染，术后密切随访，及时处理潜在风险。在我们的临床操作中，并没有发生术后流产的情况。 　　多数情况下，在孕