胃粘膜活检422例病理制片剖析.docVIP

胃粘膜活检422例病理制片剖析 　　【摘要】 目的 在环境温度较低时（室温10℃），通过病理技术的改进，使胃粘膜活检甲级制片率达97%。方法 活检标本用10%中性福尔马林充分固定；组织切片65℃，30min烤片；将二甲苯先预热至45℃-50℃再脱蜡；切片染色前先将苏木精加温至40℃-45℃再染色。结果 获得胃粘膜活检甲级制片率达到97%。结论 要想制作一张优秀的胃粘膜活检组织病理切片，不仅要通过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、烤片、HE染色，还要技术员在日常工作中增强责任心，注重每一个工作环节和细节才能取得高质量的病理切片。 　　【关键词】 胃粘膜活检组织；病理技术改进；甲级制片率 　　病理诊断是现代医学中最具权威性的诊断方法，病理诊断的准确性，一方面取决于病理医师技术水平，另一方面取决于组织病理片处理和染色效果。然而，在现实中，病理技术往往得不到应有的重视，在目前病理工作中普遍地存在着一些问题，由于标本固定时间不足，组织脱水不彻底，某些环境因素造成试剂浓度改变等，都直接影响到制片质量，给临床病理诊断带来一定的困难。对此，本人根据多年的实践经验以及对2012年1月和2月胃粘膜活检病理切片422例回顾性分析，只有技术员在日常工作中增强责任心，注重每一个工作环节和细节才能为病理诊断做出高质量的病理切片。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料来源 组织来源于上海市某二级医院2012年1月和2月胃粘膜活检病理切片422例，其中良性标本418例，恶性标本4例（包括腺癌3例，鳞状细胞癌1例）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 固定 胃粘膜活检取下后用10%福尔马林固定，固定液是标本体积的5-10倍，室温固定6-8h为最低要求。 　　1.2.2 脱水 透明 浸蜡 一般我科现在采用的胃粘膜活检的脱水步骤如下： 　　10%中性福尔马林2h，自来水15min，75%乙醇1h，85%乙醇1h，95%乙醇2h×2，无水乙醇1.5h×2，二甲苯30min×2，50℃-52℃石蜡30min×1，56℃-58℃石蜡1h×2，浸蜡温度均为62℃，其余为室温。 　　1.2.3 包埋 包埋石蜡熔点应与最后一缸浸蜡熔点一致，包埋时镊子的温度不宜过高（62℃）以免烫伤原本就很小的胃粘膜活检组织。包埋时动作要快，须将组织放平整，每一块小组织都须在同一平面上。 　　1.2.4 切片 展片 切片首先要保证刀片的锋利，固定蜡块的各个螺丝要旋紧，修蜡块时要特别小心，轻轻地把蜡块修平，修出整个切面，切片厚度3-4um，摇片时用力要均匀，速度要一致，每个蜡块至少切10片以上。展片水温要适当（40℃-45℃），水面和载玻片要洁净，切忌水面残留组织碎屑，以免污染切片。 　　1.2.5 烤片 染色 烤片的温度在65℃，时间为30min。我科HE染色操作程序如下： 　　①二甲苯脱蜡×25-10min；②无水乙醇×21-2min；③95%乙醇、90%乙醇、85%乙醇、70%乙醇各1-2min；④自来水洗2min；⑤苏木精染色5-8min；⑥水洗；1%盐酸乙醇分化；⑦流水浸洗或浸入40℃-45℃温水5-10min；⑧伊红1min后水洗，75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇×2各1-2min；⑨无水乙醇×2各5min；⑩二甲苯×3各3-5min；○11中性树胶封片，贴标签。 　　2 结果 　　422例胃粘膜标本中有2例标本切片稍有皱褶，有5张切片染色后组织结构有些模糊，细胞核染色稍发灰，其余切片染色后镜下组织结构完整，色彩鲜艳透明，细胞核呈蓝色，细胞浆呈深浅不同的粉红至桃红色，核质对比分明，核仁明显，甲级制片率达到97%。而技术改进前，422例胃粘膜标本中有9例标本切片不易有皱褶，有26张切片染色后组织结构模糊不清，细胞核染色发灰，细胞浆着色浅，核质对比不分明，核仁不明显，甲级制片率仅达90%。 　　3 讨论 　　病理切片质量高低直接影响病理诊断结果。我们在实际工作中发现，尽管在病理标本制作过程中严格按照规程操作，但有时制出的病理切片质量仍不理想，影响病理诊断[1]。制作一张优秀的胃粘膜活检切片，并不是完全依靠高昂的仪器设备，而更为重要的是需要技术员在日常工作中增强责任心，注重每一个工作环节和细节才能为病理诊断做出高质量的病理切片。 　　组织固定是做好制片的第一步，也是最关键一步。标本取下后应立即固定，固定液要充分，时间要足够。我科在标本脱水前，第一缸放入10%中性福尔马林2h就是为了让未固定好的组织继续固定。脱水是否彻底直接影响组织的透明及浸蜡，乙醇是常规组织制片最常用的脱水剂，组织脱水时应尽量避免在无水乙醇中停留的时间过长，时间太长脱水过度会造成组织过硬，过脆影响切片质量。脱水程序为梯度酒精，并要及时更换溶液。透明剂二甲苯易使组织变脆，时间要