植物组织培养试验指导书生物与环境工程系园林教研室2011年9月.DOC

植物组织培养 实验指导书 生物与环境工程系园林教研室 2011年9月 实验一　植物组织培养常用仪器设备的构造及使用 一、目的要求 （一）掌握植物组织培养常用仪器设备的结构、原理与维护； （二）熟练章握植物组织培养常用仪器设备的正确使用方法。 二、常用仪器设备 分析天平；高压灭菌器；光照培养箱；烘箱；酸度计；超净工作台等。 三、方法步骤 （－）电子分析天平的构造及使用 1．构造： 电子分析天平主要由：天平机体、称重舱、天平盘、键板（包括4个键）、液晶显示屏等构成。 2．使用： （1）调平　天平放稳后，转动脚螺旋，使水平气泡在水平指示的红环内； （2）自检　在空载下，天平内部进行自检，显示屏上相继显示CHE3→0，CAL4 LINK Word.Document.8 C:\\My Documents\\2002－2003学年第二学期：植物组织培养幻灯片\\组织培养实践指导：2003年4月7日\\组织培养实习指导2003年4月.doc OLE_LINK1 \a \r \* MERGEFORMAT →0，CAL，END，CAL，OFF； （3）全显示　按“ON／OFF”键，液晶屏进入全显示态； （4）这时再按“ON／OFF’键，液晶屏进入预热状态，有绿色指示灯显示。平时可放置在这个状态。当再启动“ON／OFF”键，又进入全显示状态； （5）清零 按Tare键，液晶屏显示“0” （6）去皮重清零　将硫酸纸放在天平盘上，再按Tare键清零，液晶屏再显示“0” （7）称样品　将药品放在硫酸纸上，至液晶屏左侧稳定标志“→”出现，读数即为样品重量。小数点前为克单位。如1．234即为1．234克。 3．注意事项： （1）本天平为精密仪器。使用时手要洁净干燥。使用的样品、容器及硫酸纸一定要洁净干燥，切勿将药品直接放到天平盘上； （2）不要把水，金属弄到天平盘上； （3）天平严禁靠近磁性物体； （4）天平使用时，不要撞击天平所在桌面，要关上附近的窗户，以防气流影响称重。 （二）立式全自动灭菌器的构造及使用 1.构造： 立式灭菌器主要由锅体、内胆、锅盖、、压力温度表、放气阀、安全阀、水位线标志、温度时间设定装置等零部件构成。 2.工作原理： 由于在密闭且耐压的容器内，产生的水蒸气可以超过一个大气压，即达到超过100℃ 3.使用： ①逆时针旋转打开锅盖，加入清水至水位指示线，并关紧放汽阀和放水阀，每次灭菌前及时补充水。 ②把连接放气阀的橡胶管插没到一个装有冷水的容器里，在温度达到102摄氏度之前，会不断排出锅内的冷空气。 ③装入培养物，将密封圈嵌入槽内，顺时针用力拧紧盖子，直到不能拧动为止； ④接通电源，按下“设置”键，设定灭菌温度及持续时间，设置完毕按下“工作”键使灭菌器开始工作，此时“工作”指示灯闪绿光。 当压力达到0．10MPa时，“计时”指示灯开始闪绿光，使压力表保持0．10～0．15MPa的范围，维持一定灭菌时间，不同消毒物品所需时间不同，一般灭菌 15～30min。 ⑤放气取物。当灭菌到所需时间时，灭菌器会蜂鸣报警，立即断开电源，让压力自然下降。当达到0．05MPa时可放出蒸气，至零时，打开锅取出物品。 （三）ｐH值计的使用 1.用标准pH值溶液标定pH值：取随机器带来的药品袋按要求配成已知pH值溶液，将联好的甘汞电极头插入溶液中，旋转定位钮，使荧屏显示值和已知pH值相同，然后固定住定位纽。 2.测定待测液：将甘汞电极头用蒸馏水洗净。插入待测液中，液晶屏的读数即为溶液pH值。若溶液有一定温度，应取温度计测量出温度，旋转pH值计的温度调节钮，使之与测量液体温度相当，再读数即可。 （四）光照培养箱 1.把接种后的培养材料放入培养箱内的搁架上，注意保持出风口畅通。 2.接通电源，按下电源开关。 3.按下温度控制仪的“设置”键，设定培养温度。 4.按下光照控制仪的“设置”键，设定光周期，即分别设定开灯和关灯时间，然后设定光照强度即可。 （五）超净台 1.接通电源，打开紫外灭菌灯，并打开风机，可选择低、中、高三种风速。 2.20分钟后可关闭紫外灯，打开照明灯，用75%的酒精棉球拭擦双手和工作台，即可开始进行无菌操作。 3.操作结束后把各种废弃物品从工作台清除，并打开紫外灯灭菌20-30分钟，关闭电源。 （六）烘箱 1.把要烘干的物品放置在烘箱的搁架上，关紧烘箱门，接通电源。 2.设定烘干温度和时间。 3.达到设定温度及时间后断电。 4.待冷却后取出。 四、作业 1.使用电子天平时需要注意哪些问题？ 2.如何用立式灭菌器对培养基灭菌？ 3.如何设置光照培养箱的光周期? 4.如何设置烘箱的烘干温度和时间? 实验二 母液的配制与保存 一、目的要求 （一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组成； （一）熟练掌握常用培养基母液