番石榴叶对斑节对虾免疫功能的影响及其抗WSSV有效成分初探-临床兽医学专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 答辩地点 答辩日期 番石榴叶对斑节对虾免疫功能的影响及其抗 WSSV 有效成分初探 摘 要 白斑综合征（WSS）自 1988 年首次发现以来，到 2000 年几乎席卷世界沿海 各国，对全球对虾养殖业造成毁灭性的打击。至目前为止，由于对 WSS 仍无有效 的治疗方法，因此对其进行早期预防就显得极为重要。番石榴叶水提取物可以有 效地消除海水中 WSSV 的感染活性，具备开发成为针对 WSSV 水体消毒剂的可能 性。为了确定其在对虾养殖中使用的可行性，本文进行了以下三个方面的研究： 首先，在基础饲料中添加六种比例的番石榴叶(0%、0.025%、0.05%、0.1%、 0.2%、0.4%，分别标记为 G0、G1、G2、G3、G4、G5)饲喂斑节对虾(体重为 1.576±0.011 g) 56 天，研究番石榴叶对斑节对虾生长和非特异性免疫功能的影响，评价番石榴 叶在对虾养殖中作为水体消毒剂使用的安全性。结果表明：试验组斑节对虾增重 率均显著高于对照组（P 0.05），其中 G1 组增重率最高，达到 308.44%。饲料中 添加番石榴叶投喂斑节对虾可以提高对虾血清和肝胰腺中酚氧化酶（PO）、 超氧 化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合成酶 （NOS）和溶菌酶（LSZ）的活力。其中血清中 PO、SOD，肝胰腺 SOD、ACP、 AKP 均在 G1 组最高，达到 7.50U/ml、178.33 U/ml、57.32 U/g protein、32.67kim unit/g protein、27.10kim unit/ g protein ，除血清 SOD 外，均显著高于对照组（P 0.05）， 后随着番石榴叶添加比例的增加而降低。血清 ACP、AKP、LSZ 和肝胰腺 LSZ 活 力随着番石榴叶添加比例的增加而增高，在 G3 组最高，达到 6.79 kim unit/100ml、 11.66 kim unit/100ml、53.95 U/ml 和 3459.95 U/ mg protein，且均显著高于对照组（P 0.05），后随着添加比例的增加而降低。血清 TNOS 活力随着番石榴叶添加比例 的增加而增高，在 G4 组最高，显著高于对照组（P 0.05），达到 64.80 U/ml，后 随着添加比例的增加而降低。因此，在对虾饲料中添加番石榴叶投喂斑节对虾， 不仅可以促进斑节对虾生长，还可以提高对虾的免疫机能，可以认为作为水体消 毒剂使用对对虾不存在负面影响，是安全的。 其次，为了探讨番石榴叶除了消除水体中 WSSV 的感染活性外，是否可以杀 灭对虾体内的病毒，从而可以在饲料中使用的可行性，研究了番石榴叶在饲料中 I 使用对斑节对虾抗白斑综合征病毒（WSSV）的影响，包括以下两个方面的内容： 1、对人工感染 WSSV 的对虾投喂含不同浓度（0%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%） 番石榴叶的饲料，在试验过程中观察死亡情况，观察治疗效果；2、对连续饲喂添 加不同浓度（0%、0.025%、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%）番石榴叶 3d、6d、12d、 24d 的对虾分别进行人工感染 WSSV，统计累计死亡率，观察预防效果。结果显示： 治疗试验中饲喂含番石榴叶饲料的试验组半数死亡时间均早于对照组；预防试验 中添加番石榴叶浓度为 0.05%、连续饲喂 6d 或添加番石榴叶浓度为 0.025%，连续 饲喂 12d，对虾的半数死亡时间出现均比对照组晚。表明：对虾感染 WSSV 后再 饲喂番石榴叶，番石榴叶对已感染斑节对虾治疗作用不明显；而对虾先饲喂番石 榴叶后人工感染 WSSV，可明显提高对虾的抗病力，且番石榴叶的添加浓度和投 喂时间长短对斑节对虾抗 WSSV 的能力均有影响，添加番石榴叶浓度为 0.025%、 连续饲喂 12d 和添加番石榴叶 0.05%，连续饲喂 6d，斑节对虾抗病力均可明显提 高。 最后，本实验利用有机萃取技术，对番石榴叶水提取物进行了初步分离，得到 石油醚相(S)、乙酸乙酯相(Y)、正丁醇相(Z)和水相(W)四个组分。然后，通过人工 感染实验，确定了各组分抗 WSSV 的效果，并通过体外实验研究了番石榴叶水提 取物及各组分对 WSSV 的影响。人工感染的结果显示：用乙酸乙酯相与正丁醇相 这两种组分分别处理 WSSV 后，对虾在用 WSSV 人工感染后未出现死亡，而用石 油醚组分处理 WSSV 后，对虾在用 WSSV 人工感染后的第 5 天开始出现死亡，第 12 天时全部死亡，表明番石榴叶中影响 WSSV 致病性的有效成分的极性较强。