水稻秸秆高效降解菌株的筛选鉴定及其降解产物分析-江苏农业科学.PDF

— ２９２— 江苏农业科学　２０１８年第４６卷第１９期 尹　蕾，王伟舵，陈子璇，等．水稻秸秆高效降解菌株的筛选鉴定及其降解产物分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１８，４６（１９）：２９２－２９６，３０５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１８．１９．０７５ 水稻秸秆高效降解菌株的筛选鉴定及其降解产物分析 １ ２ ２ ２ ２ １ 尹　蕾 ，王伟舵 ，陈子璇 ，贲爱玲 ，吴雨龙 ，黄　和 （１．南京工业大学生物与制药工程学院，江苏南京２１１８１６；２．南京晓庄学院食品科学学院，江苏南京２１１１７１） 　　摘要：由南京地区稻麦轮作农田中采集植物根围５０多份土样，通过羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）单一碳源培养、 ＣＭＣ酶活性和滤纸酶活性的测定，筛选获得高产纤维素酶菌株；以改进的ＶａｎＳｏｅｓｔ洗涤法为基础，采用差质量法测 定供试菌株处理和对照处理的水稻秸秆失质量率及纤维素降解率、半纤维素降解率、木质素降解率，综合评价高产纤 维素酶菌株对水稻秸秆的降解效果，筛选出其中降解效果较突出的枝孢菌ＢＤ－１９菌株。通过内转录间隔区（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ，简称ＩＴＳ）序列分析结合菌株生长形态特征的鉴定方法对ＢＤ－１９菌株进行鉴定。最后，利用秸秆作 为唯一碳源的基础培养基进行培养，选取３、５、１０、２０、３０ｄ等４个时间点进行取样，对样品衍生化后利用ＧＣ－ＭＳ（气 相色谱－质谱联用仪）分析枝孢菌ＢＤ－１９处理水稻秸秆后产生的有机物，同时分析不同时间段的样品中有机物种类 的变化。由结果可知，枝孢菌ＢＤ－１９具有较好的秸秆降解能力，目前对于枝孢菌作为秸秆降解菌株的研究还不够广 泛，该菌株的获得为秸秆降解菌剂的研究与应用提供了具有较高潜力的菌种。 　　关键词：秸秆降解；菌株筛选；酶活性；降解产物分析 　　中图分类号：Ｓ１８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１８）１９－０２９２－０５ 　　相关统计表明，全球每年约产出２０亿 ｔ的农作物秸秆， 基中提取有机物质，其中包括微生物分泌出的具有挥发性的 而我国产秸秆数量高达９亿 ｔ，占全世界范围内秸秆产量的 有机化合物及其降解秸秆所产生的不同有机产物，探讨枝孢 ［１］ ２０％～３０％ 。水稻秸秆主要是由纤维素、半纤维素、木质 菌ＢＤ－１９的秸秆生物降解能力，为秸秆高效降解提供菌种 ［２］ 素、粗蛋白、低分子碳水化合物及无机盐等构成的 。秸秆 资源和技术支撑。 中含有多种化学微量元素，其中硅是含量最多的矿物元 ［３］ １　材料与方法 素 。水稻秸秆中纤维素和半纤维素含量相当，均在３０％左 右，两者是维持水稻秸秆形态结构的主要物质，木质素含量较 试验于２０１５年９月至２０１６年９月在南京晓庄学院农产 低，仅为４％，粗蛋白、结构蛋白含量分别为５％、４％，硅化物 品质量与安全重点实验室内进行。 ［４］ 含量为９％ 。细菌、真菌、放线菌主要负责分解秸秆中的纤 １．１　材料与仪器 ［５］ 维素与半纤维素，部分细菌和真菌也可用于分解木质素 。 供试土样：试验土样取自南京市江宁区稻麦轮作农田，共 可以降解纤维素的真菌种类较多，分解能力较强的真菌主要 ５０份。 分为木霉属、曲霉属、镰刀菌属。木质素可以被黄单胞菌、假 主要仪器有７８９０Ａ／５９７５Ｃ气相色谱 －质谱联用仪（ｇａｓ 单胞菌、不动杆菌等菌种分解，一般情况下真菌的分解能力比 ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ，简称 ＧＣ－ＭＳ），由美国 细菌强得多［６］。 Ａｇｉｌｅｎｔ公司提供。 本研究主要筛选高效降解秸秆纤维素的微