分子遗传学技术在枫糖尿病和多发畸形中的应用研究-妇产科专业论文.docx

解放军医学院博士学位论文 解放军医学院博士学位论文 万方数据 万方数据 缩略词表 中文 英文 缩写 大规模平行测序 massively parallel sequencing MPS 非侵入性产前检测 单基因遗传病 non-invasive prenatal test monogene inheritance NIPT 多基因遗传病 polygene inheritance 染色体病 chromosomal disease 线粒体遗传病 mitochondrial disease 体细胞遗传病 somatic cell inheritance 荧光原位杂交技术 fluorescence in situ hybridization FISH 荧光定量聚合酶链反应 多重连接依赖式探针扩 增技术 quantitative fluorescent polymerase chain reaction multiplex ligation-dependent probe amplification  QFPCR MLPA 微阵列比较基因组杂交 array-based comparative genomic hybridization  aCGH 枫糖尿病 Maple syrup urine disease MSUD 支链 α 酮酸脱氢酶 branched chain α-keto acid dehydrogenase  BCKD 支链氨基酸 branched chain amino acids BCAA 单核苷酸变异 single nucleotide variants SNVs 插入缺失部位 insertion-deletion sites indels 新一代测序技术 next generation sequencing NGS 靶向基因测序 target gene sequencing TGS 植入前遗传学诊断 全基因外显组测序 Preimplantation genetic diagnosis whole exome sequencing PGD WES 1 中文 英文 缩写 全基因组测序 胎儿游离 DNA 比较基因组杂交 whole genome sequencing cell free fetal DNA comparative genomic hybridization, WGS cff-DNA CGH 2 分子遗传学技术在枫糖尿病 和多发畸形中的应用研究 中文摘要 目的： 大规模平行基因测序联合非侵入性产前检测的方法，用于辅助单基因疾病-枫 糖尿病的临床诊断，对已感染的家庭进行目标测序，为单基因病的非侵入性产前 测试，提供了一种新的有潜力一站式检测方法。将微阵列比较基因组杂交技术的 研究，用于多发畸形胎儿的分子遗传学分析，并探讨其在辅助常规染色体核型分 析中的价值。 材料与方法： 1、大规模平行基因测序联合非侵入性产前检测用于枫糖尿病的临床研究 选取曾生育过一个枫糖尿病患儿的家庭为研究对象，运用目标大规模平行基 因组测序技术，对先证者及父母的潜在突变进行了分析。为了验证大规模平行目 标测序获得的数据，对家庭所有成员的样本进行了实时 PCR 和 Sanger 测序。妊娠 13 周时从母体血浆中分离出胎儿游离 DNA，运用目标性大规模平行基因组测序技 术进行致病基因的检测。基于一家三口获得的遗传信息，构建了父母的单体型。 胎儿的基因型是来自于父母的四种可能的遗传合谱。母体基因型中每一种混合状 态的可能性和不同胎儿混合态，都由母体血浆的各种单核苷酸多态性计算得到。 从父母单体型获得的连锁关系，建立了隐马尔可夫模型，考虑到单核苷酸多态性 标记的状态和亲代重组信息。通过以上策略，则胎儿的基因型和单体型可以通过 一站式获得。在妊娠 19 周时通过侵袭性手段获得羊水用于产前遗传诊断测试。在 提取 DNA 后，用实时 PCR 和 Sanger 测序对目标变异进行了验证。再经仔细测试后 的咨询，夫妻双方最终决定终止妊娠。获得了流产胎儿的肌肉组织，并且经实时 PCR 和 Sanger 测序验证。 3 2、比较基因组杂交技术在多发畸形中的临床应用 选择 2010 年 2 月至 2013 年 5 月，在解放军总医院产前诊断中心，超声诊断 为胎儿全身多发畸形妊娠妇女 31 例，孕妇年龄 20-37 岁，孕周 21-27 周。经知情 同意后在超声引导下行羊膜腔穿刺获取带有胎儿遗传物质的样本（羊水或脐血）， 再进行常规染色体核型分析和微阵列比较基因组杂交检测，初步探讨以上两项新 技术在胎儿多发畸形分子遗传学检测中的价值和临床意义。 结果： 1、目标区大规模平行基因测序首次在中国的 3 人家庭中实施，他们可疑拥有 一个枫糖尿病孩子，在