分子遗传学基因分析在Avellino角膜营养不良一家系的应用-药理学专业论文.docx

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 英文缩略词表 英文缩写 英文名称 中文译名 CDGG-I corneal dystrophy 颗粒性角膜营养不良 Reis-Bucklers corneal dystrophy Reis—Bucklers 角膜营养 RBCD 不良 GCD-II Avellino corneal dystrophy Avellino 角膜营养不良 CDL Lattice corneal dystrophy 晶格状角膜营养不良 bp Base pair 碱基对 TGFBI transforming growth factor-beta -induced gene 转化生长因子 β 诱导基 因 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP deoxynucleotide 脱氧核糖核酸酶 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 Synonymous single nucleotide polymorphisms 同义单核苷酸多态性 SNP A Adenine 腺嘌呤 C Cytosine 胞嘧啶 T Thymine bases 胸腺嘧啶 G Guanine 鸟嘌呤 M/L Mole per liter 摩尔/升 mM/L Mill mole per liter 毫摩尔/升 mm millimeter 毫米 μl microliter 微升 PKa Acid dissociation constant logarithmic 酸度系数对数 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 Thiel-Behnke corneal dystrophy Thiel-Behnke 角膜营养 CDTB 不良 r/min Revolution per minute 转/分钟 STS Sequence tagged site 序列标记位点 TE Tris. Cl-EDTA buffer TE 缓冲液 Tris Hydroxymethyl aminomethans 三羟甲基氨基甲烷 分子遗传学基因研究在 Avellino 角膜营养不良一家系 的应用 摘要 背景 角膜营养不良（corneal dystrophy）是一种少见的眼科遗传病, 会导致严重 的视力损害。角膜营养不良分为很多类型，其中研究的最多的是与TGFBI基因相关 的角膜营养不良，多为常染色体显性遗传病，研究表明TGFBI基因即转化生长因子 β诱导突变基因，位于染色体5q31上, TGFBI(BIGH-3)相关的角膜营养不良包括典 型颗粒性角膜营养不良（GCD，CDGG-I）与晶格状角膜营养不良（CDL），Avellino 角膜营养不良(GCD-II)， Reis—Bucklers角膜营养不良(Reis-Bucklers corneal dystrophy，RBCD) ，Avellino角膜营养不良（Avellino corneal dystrophy）其 发病较早，外显率高，可90%，男性与女性患病率无显著差别。 目的 对角膜营养不良一家系进行临床眼科检查及分子遗传学分析和分类，了解其 家系是否存在TGFBI基因突变及TGFBI基因的突变类型。 方法 收集1个临床诊断为Avellino角膜营养不良的家系，家系中4名为角膜营养不 良患者, 2名为表型正常成员，50名健康人群为对照。对所有参加实验的实验对象 进行详细视力检查，病史询问和裂隙灯显微镜检查，并抽取外周血5 m1置于EDTA 抗凝真空采血管中。使用血液基因组DNA提取试剂提取血液DNA。后设计TGFBI 基因所有17个外显子的特异性引物，利用17个特异性引物进行聚合酶链反应扩增 目的片段，对PCR反应产物行DNA测序，将测序结果和GenBank进行比对并分析。 结果 该角膜营养不良家系4名患者裂隙灯显微镜检查显示中央角膜基质浅层均有 雪花状，盘状，结晶状，杆状角膜混浊，混浊间隙及周边角膜透明。4名患者TGFBI 基因第4号外显子存在CGCCAC(R124H)杂合突变，而家系表现正常成员及50名正 常对照无此基因位点突变。同时4名患病家庭成员均存在同义单核苷酸多态性 (SNP)：第11号外显子杂合性的CTCCTT(L472L)，3名患者第12外显子杂合性的 TTTTTC (F540F) 一名患者为纯合性的TTTTTC (F540F)，一名家系表现正常成 员存在该位点杂合同义SNP，另一名家系表现正常成员及50名正常对照无该位点杂 合同义SNP。 结论 通过分子遗传学方法明确该角膜营养不良家系存在TGFBI基因突变，为 R124H杂合