大块异种脱细胞骨基质的制备及组织相容性研究-人体解剖与组织胚胎学专业论文.docx

I I 摘要 目 的：探讨大块异种脱细胞骨基质( Acellular bone extracellular matrix ,ABECM)的制备及组织相容 性,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。 方 法：取牛股骨下端松质骨切割制作 4.0 cm×2.0 cm×2.0 cm 及 4.0 cm×2.0 cm×1.0 cm 大小的骨 块，两种骨块分别用 10% NaCl 和 0.5%曲拉通 X-100 联合脱细胞处理，分为 48 h.72 h.96 h 三个时间 段；处理后的大块异种脱细胞骨基质行 HE 染色，Masson 染色及扫描电镜观察，观察大块异种脱细 胞骨基质的脱细胞程度；用处理后的大块异种脱细胞骨基质制作浸提液，行急性毒性实验、热源实 验，观察大块异种脱细胞骨基质有没有毒性反应及热源性；用处理后的大块异种脱细胞骨基质材料 与 SD 大鼠骨髓间充质干细胞体外复合培养，观察细胞生长、细胞增殖及蛋白质含量测定。 结 果: （1）4.0cm×2.0cm×1.0cm 经过 10%NaCl 和 0.5%曲拉通 X-100 联合处理 72h、96h 及 4.0 cm ×2.0cm×2.0cm 经过 10%NaCl 和 0.5%曲拉通 X-100 联合处理 96h 三组的异种 ABECM 经 HE 染色 及扫描电镜观察未见细胞成分，Masson 染色观察胶原纤维基本结构未被破坏，材料浸提液急性毒性 实验、热源实验符合规定标准，且骨髓间充质干细胞能够贴附在异种脱细胞骨基质孔隙内生长,细胞 生长及蛋白合成功能不受异种脱细胞骨基质的影响。（2）4.0cm×2.0cm×1.0cm 经过 10%NaCl 和 0.5%曲拉通 X-100 联合处理 48h 及 4.0cm×2.0cm×2.0cm 经过 10%NaCl 和 0.5%曲拉通 X-100 联合 处理 48h、72h 三组的异种 ABECM 与 BMSCs 复合培养，通过细胞计数及细胞蛋白含量测定，在试 验后期对照组在细胞数量及蛋白含量上都多于实验组，表明上述三组大块异种 ABECM 脱细胞程度 不完全，对 BMSCs 的生长有一定的影响。 结 论: （1）本试验制备复合条件的大块异种 ABECM,说明利用高渗 NaCl 与曲拉通 X-100 联合脱 细胞的方法是可行的。（2）大块异种脱细胞骨基质具有良好的组织相容性, 可根据临床大块骨 缺损的实际形状、大小等需要，方便地切割制作大块异种 ABECM 支架材料，更好地满足临床 大块不规则骨缺损修复的需要，大块异种脱细胞骨基质可作为骨缺损修复的支架材料。 关键词：大块；异种；脱细胞骨基质；制备；组织相容性 论文类型：A(基础研究) II II Abstract Objective: To explore the best methods of preparation of massive heterogenous acellular bone extracellular matrix (ABECM) and its histocompatibility , to provide experimental basis for the clinical use in the bone reconstruction field. Methods:Bovince lower femur cancellous bone was cut into 4.0cm×2.0cm×2.0cm and 4.0cm×2.0cm× 1.0cm,then were approached acellularly by 10 % sodium chloride and 0.5% TritonX-100 with three time periods of 48h.72h.96h. Specimens were stained with HE ,Masson and observed with naked eyes ,microscopy and scanning electron microscopy ,to observe the acellular degree of ABECM；To evaluate the biocompatibility through acute toxicity test and pyrogen test; Bone marrow mesenchymal stem cells were seeded into acellular bone extracellular matrix and cultured in vitro ,then their morphological characterist