结核分枝杆菌16kD38kD19kD融合蛋白的构建、表达及纯化.docVIP

结核分枝杆菌16kD-38kD-19kD融合蛋白的构建、表达及纯化 赵爽1马晓蕾2张新慧2常琳2席志慧2（通讯 ） （1沈阳市第四人民医院儿科辽宁沈阳110031） （2沈阳万类生物科技有限公司辽宁沈阳110000） 】目的：构建结核分枝杆菌（MTB） 16kD-38kD-19kD融合基因重组质 粒，并对融合蛋白进行表达及纯化。方法：利用PCR方法分别扩增16kD、38kD 及19kD基因，经过双酶切依次与pET28a载体连接，构建pET28a-16kD-38kD-19kD 融合基因重组质粒，转化至大肠杆菌表达株BL21中，经IPTG诱导获得目标蛋白， 并进行镍柱纯化。结果：经过酶切及测序鉴定证实pET28a-16kD-38kD-19kD重组 质粒构建正确，并经原核表达及纯化获得融合蛋白。结论：成功构建并表达纯化 16kD-38kD-19kD融合蛋白，为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。 关键词】结核分枝杆菌；16kD蛋白；38kD蛋白；19kD蛋白；融合蛋白 】R394 】A 】1007-8231 （2015） 10-0221-03 Construction, Expression and Purification of Recombinant Fusion Proteins 16kD-38kD-19kD of Mycobacterium tuberculosis Abstract】 Objective To construct the recombinant plasmid of Mycobacterium tuberculosis （MTB） 16kD-38kD-19kD fusion gene, and to express and purify the fusion protein.Methods: 16 kD, 38 kD and 19 kD protein genes were amplified from the genome of Mycobacterium tuberculosis by PCR, and inserted into the pET28a vector after restriction enzyme digestion. PET28a-16kD-38kD-19kD recombinant plasmid was constructed and transformed into E.coli BL21, and the target protein was induced by IPTG, then the purified protein was obtained by Ni-NTA affinity chromatography. Results PET28a-16kD-38kD-19kD recombinant plasmid was confirmed by restriction enzyme digestion and sequencing, and the fusion protein was obtained by prokaryotic expression and purification.Conclusion Construction, expression and purification of 16kD-38kD-19kD fusion protein, which lays the foundation for the development of the tuberculosis specific antigen. Key words】 Mycobacterium tuberculosis; 16 kD protein, 38 kD protein; 19 kD protein; Fusion protein 结核病（TB）是危害人类健康的一种重要传染病，发病率及病死率居高不下。 在我国结核病人数量位居世界第二，仅次于印度,对公共卫生体系造成沉重负担。 准确、快速的对结核分枝杆菌感染进行诊断是肺结核防治的重要一环，0前结核 病诊断仍主要依赖于临床观察、痰涂片检测以及细菌培养，但是涂片阳性率低而 iL培养耗时过长影响检测的效率，因此，近年来血清免疫学诊断以简单、快速、 经济等优点受到重点关注。近年来人们对MTB培养液进行较多研究，并分离出 多种蛋白，如Ag85、16kD、38kD、19kD、CFP10等，但是单一抗原的血清学诊 断敏感度有限，难以区分患结核病以及结核菌感染人群［1-3］。本研究分别扩增了 16kD、38kD、19kD基因片段并依次构建于原核表达载体形成融合基因，并在大 肠杆菌中成功表达及鉴定，为结核病的临床诊断提供一个候选