组培实验报告烟草的再生.docVIP

题 目： 烟草的再生 姓 名： 专业班级： 学 号： 指导老师.? 2012年10月13日 烟草的再生 、/a —1— 刖g 植物组织培养是指用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的 条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也称之为离体培养或试管培养。细胞全 能性是指植物体的每一个異有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在 一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。细胞全能性是植物组织培养的理论 基础。 一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发育后，一般不会再冋复到未分化状 态，但在组织培养条件下，可能发生脱分化和再分化。脱分化：将己分化的不分裂 的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变 为分生状态的过程叫脱分化。再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下 可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 植物组织培养的过程： 离体的楨物 器官、组织、 细胞脱分化愈伤组织再分化 根 离体的楨物 器官、组织、 细胞 脱分化 愈 伤 组 织 再分化 根 再 牛 ■ 工 植 株 植物组织培养的类型，按材料分为：愈伤组织培养、器官培养（胚、胚乳、珠 心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织的培养）、细胞培养（悬浮细胞培养和 单细胞培养）、原生质体培养。木次实验采用的就是器官培养，以烟草叶作为培养材 料。 植物组织培养可以分为初代培养和继代培养。初代培养是指外植体的最初培养。 继代培养是将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培 养，成为继代培养。 植物组织培养的特点：1、培养条件可以人为控制。2、生长周期短，繁殖率高。 3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。故植物组织培养具有良好的前景，可 用于快速繁殖、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、单倍体育种等。 、实验目的 1、 了解掌握组织培养的基本概念和基本原理。 2、 了解开展组织培养工作的基本设施。 3、 了解无菌操作和组织培养的操作技术。 二、 实验原理 植物体细胞具有细胞全能性。细胞一旦脱离Y母体植株，拜托了原來所受到的遗 传上的控制和生理上的制约，在一定的培养条件下，就会发生一种冋复变化，从而 失去分化状态，变为分生细胞，实现脱分化过程。然后，这些脱分化细胞经过连续 的有丝分裂，形成愈伤组织，即指在人工培养基上外植体长出来的一团无序生长的 薄璧细胞。当试管苗在瓶内长满并长到瓶塞，或培养基利用完时就要转接，进行继 代，可迅速得到人量试管苗，以便到一定数量时进行移栽。 三、 实验材料、药品及仪器 实验材料：烟草的叶片 实验药品：MS培养基所需的各类药品、蔗糖、琼脂条、lmol/LNaOH、70%酒精、 升汞、蒸馏水 实验仪器：烧杯、玻璃棒、电子天平、电炉、容量瓶、pH计、塑料瓶、搪瓷杯、 量筒、移液管、洗耳球、锥形瓶、漏斗、牛皮纸、棉线、高压蒸汽灭 菌锅、超净工作台、酒精灯、镊子、手术刀、接种针、培养皿、滤纸、 酒精棉培养箱、记号笔 四、 实验步骤 （一）MS基本培养基贮备液的配制 在植物组织培养工作中，配制培养基是円常必备的工作。为了使用方便和用量 准确，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不 但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而i还便于低温保藏。一般 母液配成比所需浓度高10-100倍。 按表1所示数据分别配制：①大量元素贮备液，②微量元素贮备液，③铁盐贮 备液，④除蔗糖以外的有机物质贮备液和⑤CaClJt备液。 表1 MS培养藻的贮备液 成分浓缩倍数贮备液浓度(mg/L)各药品的用量(mg)配1L培养基的用量(ml) 贮备液I NH4NO3 82500 16500 KNO3 50 95000 19000 20 MgSO4 ? 7H2O 18500 3700 KH2PO4 8500 1700 贮备液II KI 166 16.6 H3BO3 1240 124 MnSO4 ? 4H2O 4460 446 ZnSO4 ? 7H2O 200 1720 172 5 Na2 ? MoO4 ? 2H20 50 5 CuSO4 ? 5H2O 5 0.5 C0CI2 ? 6H2O 5 0.5 贮备液III FeSO4 ? 7H20 200 5560 556 5 Na2 ? EDTA ? 2H20 7460 746 贮备液IV 肌醇 20000 2000 烟酸 100 10 盐酸吡哆醇 200 100 10 5 盐酸硫胺素 20 2 甘氨酸 400 40 贮备液V CaCl2 50 22000 3320 20 (1)大量元素的配制 在配制大量元素无机盐母液吋，要防止在混合各种盐类吋产生沉淀，各种药品 必须在充分溶解后才能混合，同时在混合时要注意先后次序，把钙离子(Ca2+)、