差异蛋白质组学技术研究进展-毕业(学术)论文设计.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT 2 本科生毕业论文 论 文 题 目：差异蛋白质组学研究进展 学 生 姓 名： 学 号： 学 院： 药 学 院 专 业 方 向： 中药学本科 班 级： 2008级4班 指 导 教 师： 论文完成日期： 2012年6月 PAGE \* MERGEFORMAT 13 差异蛋白质组学研究进展 [摘要] 2001年， science杂志把蛋白质组学列为六大研究热点之一，说明该研究领域日趋受到重视。大批相关研究的涌现更是证实了这一点，蛋白质组学的研究能够更直接的揭示生命的奥秘，而且与我国中医的“生命整体观、辨证论治”有很大相似之处，作者认为这才是中医药发展的真正技术与方向。然而蛋白质组是不断变化的，其复杂性远远超过基因组，因为从DNA到蛋白质，存在3个层次的调控，即转录水平调控、翻译水平调控及翻译后水平调控。因此，给我们研究蛋白质组带来了挑战，而差异蛋白质组不需得到所有的蛋白质只需研究差异蛋白及其功能，可以揭示生命活动的规律，还可以为许多重大疾病的机理、诊断、防治等提供研究基础。本篇文章主要就差异蛋白质组学的一些常用技术及其进展做一综述。 [关键词] 差异蛋白质组学；症候蛋白质组学； Research progress on different proteome [Abstract] [Key words] 差异蛋白质组学概念 蛋白质的合成受时间和空间等许多条件控制，在不同细胞中蛋白质合成及表达的种类和数量有相当大的差异;即使在同一细胞发育的不同阶段，蛋白质组的组成也在不停的变化，是一个动态的过程;病理状态下的细胞蛋白质组与正常生理条件下的也是不同的，这都需要通过差异蛋白质组学来进行研究和分析。所以，差异蛋白质组学的概念就是针对不同空间、不同时间上动态变化着的蛋白质组的整体进行比较，分析不同蛋白质组之间蛋白质在表达数量、表达水平和修饰状态上的差异，并研究差异蛋白质及其功能，找到疾病发生过程中的标志性蛋白。 差异蛋白质组学主要就是比较不同条件下蛋白质组的变化和差异，发现和鉴定不同条件下蛋白质组中的差异成分，从而揭示一定的生物学现象和规律[1]。 差异蛋白质组学研究技术 当前，蛋白质组学研究的核心技术是以双相凝胶电泳为主的蛋白质分离技术、以质谱技术为主的蛋白质鉴定技术、蛋白质相互作用分析技术和生物信息学为主的蛋白质分析技术。 2.1 蛋白质分离技术 就蛋白质的分离而言，可分为基于凝胶系统的分离技术和基于非凝胶系统的分离技术。至于先用凝胶粗分再辅以非凝胶技术细分的“杂合”分离技术，因其主要分离部分与瓶颈在于凝胶系统，因此大多将其归于基于凝胶系统的分离技术[2]。另外，激光捕获微切割技术实现了从组织水平直接获得蛋白样品。 2.1.1 基于凝胶系统的分离技术 （1）双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)技术由O’Farrell和Klose等于1975年创建。其原理是第一向为等电聚焦 (Isoelectrofocusing，IEF)，由于等电点的不同蛋白质被分离;第二向是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacryl amide geleleetrophoresis， SDS)，就是将等电聚焦后的胶条放在SDS上，然后根据蛋白质分子量的不同来进行电泳分离;最后通过考马斯亮蓝或银染色来显示电泳的结果，这样就可以根据斑点强度的不同来比较不同样本蛋白的相对分子质量及含量。其经典技术路线是样品→二维电泳→蛋白分离→染色(分银染和荧光染色)→蛋白质点切割→酶切消化→脱盐浓缩→点样→质谱分析→自动搜索数据库来鉴定蛋白质[3]。与传统两性电解质载体在电流作用下形成pH梯度不同，IPG由丙烯酰胺衍生物与聚丙烯酰胺共价聚合而成固相pH凝胶梯度，IPG形成的pH梯度稳定，聚集准确，消除传统IEF阴极漂移问题，显著提高双向凝胶电泳结果的重复性，并且增加了对低丰度蛋白质的分离检出率。近