利用响应面法优化BacillusnattoTK.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（４）：５９～６５ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 技术与方法殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 利用响应面法优化ＢａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏＴＫ１产脂肽 发酵培养基  曹小红 　 蔡　萍　李　凡　王春玲　鲁梅芳 （天津科技大学 食品工程与生物技术学院天津市食品营养与安全重点实验室　天津　３００４５７） 摘要　用响应面法对ＢａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏＴＫ１发酵产脂肽的培养基进行优化。首先用ＰｌａｃｋｅｔｔＢｕｒｍａｎ 法筛选出三个影响较大的重要因素，分别为：蛋白胨、酵母粉、ＣａＣｌ，然后进行最陡爬坡实验逼近 ２ 最佳响应面区域，最后通过ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ设计，利用ＳＡＳ软件进行回归分析，得到各因素的最佳浓 度。在优化培养基条件下，发酵液的溶血圈直径较初始培养基提高了２９．３％，脂肽的产量提高了 约３０％。 关键词　ＢａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏＴＫ１　脂肽　响应面法　优化 中图分类号　Ｑ８１５ 　　Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ能够产生多种具有抗菌活性的肽类 初步优化的基础上，采用响应面法对ＴＫ１产脂肽的发 物质，其中的一种脂肽ｓｕｒｆａｃｔｉｎ由于其独特的非核糖体 酵培养基进一步优化。 合成机制及广泛的生物活性受到国内外研究者的关 　　响应面法（ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ＲＳＭ）是利 ［１］ 注。Ａｒｉｍａ等 最早纯化并初步鉴定了ｓｕｒｆａｃｔｉｎ的结 用合理的实验设计并通过实验得到一定数据，采用多 构，实验证明ｓｕｒｆａｃｔｉｎ在２０ ｍｏｌ／Ｌ的浓度下能将水的 μ 元二次方程来拟合因素和响应值之间的函数关系，通 表面张力由７２ｍＮ／ｍ降低至２７ｍＮ／ｍ；进一步的研究 过对回归方程的分析来寻求最优工艺，解决多变量问 表明， ｓｕｒｆａｃｔｉｎ具有较强的溶解血细胞的能力，并根据 题的一种统计学方法。与通常采用的单因子和正交实 这一特性建立了经典的筛选产 ｓｕｒｆａｃｔｉｎ微生物的血平 验无法找到整个区域上各个因素的最佳组合及响应值 ［２，３］ ［４］ ［５］ 板法 ；此外它还具有抗菌 、抗肿瘤 、抗支原 的最优值比较， ＲＳＭ试验次数少、周期短，求得的回归 ［６］ ［７］ 体 和降低胆固醇 等功能，是一种在医学制药、石 方程精确度高，又能研究几个因素间交互作用，是降低 油工业、农业防治、食品防腐等方面都有广泛应用前景 开发成本、优化加工条件、提高产品质量、解决生产过 的微生物次级代谢产物。 程中实际问题的一种有效办法，目前已广泛地应用于 　　Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ最早是由日本学者从纳豆中分离得 ［９］ 农业、生物、食品、化学、制造等领域 。 到的，其原始菌株与Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ相同，是枯草芽孢 杆菌的一个亚种。本实验室从日本纳豆中分离得到一 １　材料与方法 株产 ｓｕｒｆａｃｔｉｎ的纳豆枯草芽孢杆菌，将其命名为 １．１　材　料 ＢａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏＴＫ１（简称ＴＫ１）。为了提高发酵液中脂 １．１．１　菌　种　Ｂａｃｉｌ