a-33p靶向Smad.PDFVIP

J South Med Univ, 2018, 38(10): 1203-1208 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2018.10.08 ·1203 · miR-miR-199199a-a-33pp 靶向靶向SmadSmad11 促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达 1 2 3 3 3 3 3 3 1, 3 梁景南 ，朱文思 ，张 灼 ，朱杰宁 ，符永恒 ，林秋雄 ，邝素娟 ，张梦珍 ，单志新 1 2 3 南方医科大学药学院，广东 广州 510515 ；广东省妇幼保健院药学部，广东 广州 511400 ；广东省心血管病研 究所，广东省人民医院//广东省医学科学院医学研究中心，广东 广州 510080 摘要：目的探讨微小RNA- 199a-3p （miR- 199a-3p ）对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法 原代分离并体外培养成体 C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞；脂质体转染法将miR- 199a-3p 模拟物和Smad1 siRNA 瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞；双荧光 素酶报告基因实验检测miR- 199a-3p 与潜在靶基因Smad1 3端非翻译区（3-UTR）的结合作用；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和 Western blot 法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR- 199a-3p 后，Smad1及纤维化相关基因表达。Western blot 检测转染 miR- 199a-3p ，Smad1 siRNA 后，小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1 和Smad3 的激活水平。结果 RT-qPCR 和 Western blot 结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR- 199a-3p 可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示 miR- 199a-3p 与Smad1 3-UTR 有结合作用。RT-qPCR 和Western blot 结果证实miR- 199a-3p 可在转录水平抑制Smad1表达。 过表达miR- 199a-3p 和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3 通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论 miR- 199a-3p 通过靶向Smad1，从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。 关键词：心肌纤维化；心肌成纤维细胞；微小RNA ；Smad1 MicroRNA-199a-3p enhances expressions of fibrosis-associated genes through targeting Smad1 in mouse cardiac fibroblasts 1 2 3 3 3 3 3 3 LIANG Jingnan , ZHU Wensi , ZHANG Zhuo , ZHU Jiening , FU Yongheng , LIN Qiuxiong , KUANG Sujuan , ZHANG Mengzhen , SHAN Zhixin1, 3 1School of Pharmacy, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2Department of Pharmacy, Guangdong Women and Childrens Hospital, Guangzhou 511400, China; 3Research Center of Medical Sciences, Guangdong Cardiovascular Institute, Guangdong General Hospital, Guangdong Academy of M