布鲁氏菌疫苗株流产相关因子Omp25蛋白和宿主胚胎滋养细胞相互作用的分析.doc

布鲁氏菌疫苗株流产相关因子 Omp25 蛋白与宿主胚胎滋养细胞相互作用的研究 中 文 摘 要 布鲁氏菌病（brucellosis）(以下简称布病)是由布鲁氏菌（brucella）引起的人、畜 共患传染病，广泛分布于世界各地。布鲁氏菌病对我国经济建设、人民健康生活、国家 安全等存在着严重的威胁。 布病的病原为布鲁氏菌，是一种胞内寄生菌。它的致病机制以胞内生存为主要特征。 研究表明，动物胎盘是布鲁氏菌生存、繁殖的嗜好区域之一。胚胎滋养层细胞是布鲁氏 菌感染的靶细胞，一旦被破坏，容易引起流产，但是其分子机制目前还不清楚。因此， 以布鲁氏菌和胚胎滋养层细胞为研究对象具有重要意义。本研究主要包括以下几方面内 容： ⑴．流产布鲁氏菌 S19 omp25 基因 Bait 载体的构建及鉴定。通过对流产布鲁氏菌 S19 omp25 基因进行克隆、连接、酶切、纯化等实验，构建重组质粒pGBKT7-omp25 并将其转化到酿酒酵母 Y187 中，通过酵母自激活实验和毒性实验检测转化子酿酒酵母 Y187（pGBKT7-omp25）的构建。经 PCR、酶切、测序表明成功构建了 pGBKT7-omp25 真核表达载体，获得的转化子酵母 Y187菌株无自激活活性，无毒性。 ⑵．流产布鲁氏菌 S19 侵染 TGC 细胞后提取总RNA 构建 cDNA 文库。 首先用布 鲁氏菌 S19 侵染牛胚胎滋养层细