猪圆环病毒的分离鉴定与检测方法的建立.doc

摘 要 猪圆环病毒（PCV）是近年受到广泛关注的危害世界养猪业的重要病源之一。PCV 具有 PCV1 和 PCV2 两种基因型。根据致病性、抗原性、核苷酸序列，将从 PK15 细胞系分离的圆环 病毒列为圆环病毒 1 型（PCVl），把与断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等密切相关的圆 环病毒列为 2 型（PCV2）。本研究主要是从河北保定地区某猪场疑似 PMWS 的发病猪病料中分 离到一株病毒，经 PCR 鉴定、生物学特性的鉴定，进而建立快速准确的临床诊断方法。 无菌采集疑似 PMWS 的病猪病料，将其腹股沟淋巴结接种 PK-15 细胞。由于猪圆环病毒 在 PK-15 细胞上不产生细胞病变，接种 72h 后收毒，盲传至四代。根据 GenBank 上已发表的 PCV2 基因序列，设计并合成了一对扩增 ORF2 基因序列的特异性引物，对细胞毒提取DNA， 经 PCR 扩增，得到 485bp 特异性的核酸片段。 本研究采用过氧化物酶单层实验（IPMA）测定 PCV2 分离毒的 TCID50，并基于此方法对 理化特性进行研究。实验结果表明：该毒株病毒液在 PH3 和 PH12 作用 1h 后 TCID50 均没有显 著变化，毒株表现出较强的耐酸碱性；对胰蛋白酶不敏感；经乙醚、氯仿处理后 TCID50 的差值 均小于 2，说明该病毒没有囊膜。试验结果均符合 PCV2 生物学特性。 根据 G