基因工程PPT课件 第章 基因的表达与调控（上）-原核基因表达调控模式.pptVIP

调节蛋白AraC的作用 第一，它调节它自己的生物合成。 当AraC水平较低时，其基因从Pc开始表达。当AraC蛋白浓度高时，由于AraC与AraO1结合，而araO1与AraC基因的启动子重叠，可阻遏araC基因的表达。 第二，它对araBAD既是负的调节子也是正的调节子(regulator)，它既能结合于araO2又能结合于araI。通过两种异构体实现：Pr（阻遏作用）；Pi（诱导作用）。 负调控 当cAMP水平较低且缺乏阿拉伯糖时，AraC二聚体结合在araO2和araI位点使DNA成环，阻遏araBAD的表达。 正调控 当Ara存在而无葡萄糖时，Ara与AraC蛋白结合使其构象改变而释放araO2，此时AraC结合在araO1和araI处。同时由于cAMP的积累激活CRP，活化的CRP结合在位于araO1和araI间的CRP位点。 araC+Ara和CRP共同作用可激活RNA pol转录araBAD。因此，AraC具有正、负调控的双重作用。 由于Ara+araC结合在araO1处使araC不能表达。 但当同时有葡萄糖和Ara时，由于cAMP不能激活CRP，araBAD则不表达，同时araC也不表达。 3、小结 ①AraC蛋白是双功能的，单纯的C蛋白结合于araO1(-100~-144)，起到阻遏的作用；当C蛋白和诱导物Ara结合形成的复合体时是Cind蛋白（ind是induction的缩写），即诱导型的C蛋白，它结合于araI区（-40~-78）使RNA 聚合酶结合于PBAD位点（+140），转录B、A、D三个基因； ②C蛋白结合araO1时也反馈性地阻遏了其本身的表达； ③C蛋白的两种状态（Pr和Pi）功能不同，结合的位点也不同。Pr结合于araI ,araO1和araO2 ；Pi可结合于araO1和araI； ④ara操纵子的C蛋白还可以调节分散的基因araE和F，因此此转录单位也称调节子（regulon）； ⑤本操纵子有两个启动子Pc和PBAD，可以双向转录； ⑥Pc启动子和araO1重叠。 第五节 转录水平上其它调控 转录过程涉及转录机器附着与DNA，识别启动子序列，起始RNA的合成，延伸和终止。转录的任何一步都受到调控。转录水平上以下其它调控方式： σ因子的调节作用 组蛋白类似蛋白的调节作用 转录调控因子的作用 抗终止因子的调节作用 * 长江大学 生命科学学院 * 第六节 转录后调控 * * 基因表达的转录调控是生物最经济的调控方式。但转录生成mRNA以后，再在翻译或翻译后水平进行“微调”，是对转录调控的补充，它使基因表达的调控更加适应生物本身的需求和外界条件的变化。调控方式有： mRNA自身结构元件对翻译起始的调控 mRNA稳定性对转录水平的影响 调节蛋白的调控作用 反义RNA的调节作用 稀有密码子对翻译的影响 重叠基因对翻译的影响 翻译的阻遏 魔斑核苷酸水平对翻译的影响 第六节 转录后调控 * * 1. 翻译起始的调控 遗传信息的翻译起始于mRNA上的核糖体结合位点（RBS）——起始密子AUG上游的一段非翻译区。在RBS中有SD序列，与核糖体16S rRNA的3’端互补配对，促使核糖体与mRNA相结合。 RBS的结合强度取决于SD序列的结构及与AUG的距离。SD与AUG相距一般以4～10核苷酸为佳，9核苷酸最佳。 SD序列的微小变化，往往会导致表达效率成百上千倍的差异，这是由于核苷酸的变化改变了形成mRNA 5’端二级结构的自由能，影响了30S亚基与mRNA的结合，从而造成了蛋白质合成效率上的差异。 第六节 转录后调控 * * 2. mRNA稳定性对转录水平的影响 所有细胞都有一系列核酸酶，用来清除无用的mRNA。一个典型的mRNA半衰期为2-3min。mRNA分子被降解的可能性取决于其二级结构。 3. 蛋白质的调控作用 细菌中有些mRNA结合蛋白可激活靶基因的翻译。相反，mRNA特异性抑制蛋白则通过与核糖体竞争性结合mRNA分子来抑制翻译的起始。大肠杆菌中的核糖体蛋白就存在翻译抑制现象。 第六节 转录后调控 * * 4. 反义RNA的调节作用 RNA调节是原核基因表达转录后调节的另一种重要机制。细菌相应环境压力的 改变，会产生一些非编码小RNA分子，能与mRNA中的特定序列配对并改变其构象，导致翻译过程的开启或关闭等作用。 第六节 转录后调控 * * 5. 稀有密码子对翻译的影响 dnaG、rpoD及rpsU属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子，而这3个基因产物在数量上却大不相同，每个细胞内50个拷贝的dnaG蛋白，2800个拷贝的rpoD蛋白；40000个拷贝的r