金黄色葡萄球菌血清8型荚膜多糖的提取纯化与其偶联物免疫学特性的分析.doc

摘 要 金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎（cow mastitis）的主要病原菌之一，而荚膜多 糖和黏附素是金黄色葡萄球菌最主要的毒力因子。当金黄色葡萄球菌侵入机体后，由 于荚膜多糖的抗吞噬作用，使其难以被吞噬细胞吞噬清除，进而细菌的黏附素识别并 特异性的黏附到组织、细胞的特定分子上是感染的关键，细菌成功定植后，进一步产 生酶和毒素，使得感染难以控制。因此本文通过化学方法将荚膜多糖和黏附素蛋白偶 联，制备偶联物，并对其进行免疫学特性的研究。从而为构建金黄色葡萄球菌荚膜多 糖-黏附素蛋白二价毒力因子疫苗奠定了理论和实验基础。 本实验研究在哥伦比亚固体培养基中添加不同的营养成分，通过观察菌落生长情 况，从而对金黄色葡萄球菌的培养条件进行优化。用此条件培养的金黄色葡萄球菌菌 株，采用加酶法对血清 8 型荚膜多糖进行提取，并用酚提蛋白法和过柱层析法对提取 的粗糖进行纯化，同时用苯酚-硫酸法测定多糖含量。在获得纯化的血清 8 型荚膜多 糖的基础之上，以己二酰肼为间桥，碳二亚胺为偶联剂，纯化的 ClfA-FnBPB 融合蛋 白为载体蛋白，使 CP 和 ClfA-FnBPB 偶联制备偶联物。在偶联过程中确定荚膜多糖- 蛋白质偶联物的最佳质量比。其次，利用紫外光谱扫描法、苯酚-硫酸法等对偶联物 进行定性和定量分析并计算偶联比。最后，用制备的偶联物免疫 BalB/c 小鼠，同时 用间接 ELISA 法