生化实验课件 小鼠肝组织na提取及rt-pcr实验.pptVIP

小鼠肝组织RNA提取及RT-PCR 一、试剂及材料 1、小鼠肝脏 2、DEPC处理过的EP管、PCR管 3、 Trizol 、氯仿、异丙醇、DEPC水 二、实验原理 三、实验步骤 RNA提取 1、新鲜肝组织置EP管中，加200?l Trizol充分研磨后，补加800?l Trizol，枪头吹匀。 2、加入200?l 氯仿，剧烈震荡15秒，4℃ 12000g离心15min。 3、将上层水相移至洁净EP管中，加入500?l异丙醇颠倒混匀。 4、4℃ 12000g离心10min。 5、弃水相，EP管开盖干燥，溶于50?l DEPC水中。 RT-PCR：RNA的反转录 + cDNA的PCR RT-PCR操作步骤 5x Prime Script Buffer 2 ?l ① Prime Script RT Enzyme Mix 0.5 ?l ② Oligo dT primer (50 ?m) 0.5 ?l ③ Random 6 mers (`100 ?m) 1 ?l ④ 提取的RNA 0.5 ?l RNase Free 水 5.5 ?l ⑤