生化实验课件 验八 聚合酶链反应.pptVIP

聚合酶链反应 PCR [目的] 掌握聚合酶链反应的原理和方法 [原理] PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR反应分3步: ①变性:通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离形成单链DNA， ②退火：当温度突然降低时，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链， ⑧延伸：在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸底物及Mg 2+存在的条件下，5’→3’的聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应， 以上3步为一个循环，每一循环的产物可以作为下—个循环的模板；数小时之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达2×106-7拷贝。 [实验步骤] 一、PCR反应体系 二、PCR反应循环设置 94℃ 4min 94℃ 30sec 55℃ 30sec 25cycles 72℃ 30sec 72℃ 5min 三、电泳鉴定 Marker: 1μl DNA染料 2μl 上样缓冲液 9μl DNA Marker 样品: 1μl DNA染料 2μl 上样缓冲液