生化实验课件 验四、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清ldh.pptVIP

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离LDH 【实验原理】 电泳概述及原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 乳酸脱氢酶同工酶及酶活性染色原理 一、概述 1、电泳概念： 带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。 2、电泳技术优点： 快速、准确、重现性好 3、电泳方法分类 4、电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物（区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽） 二、电泳的基本原理 迁移率：带电颗粒在单位电场强度下的移动速度。 m ＝v/E=(d/t)/(V/L)=(dL)/Vt 影响电泳的因素： 1、颗粒本身：带电量、大小、形状 2、外界因素：电场强度E、pH、离子强度I、电渗、缓冲液粘度及温度等。 1、带电颗粒的物理性状 包括带电颗粒电荷数，颗粒大小、形状和空间构型。 Q↑，v ↑；r ↑，v↓。 2．支持物介质 支持物的多孔结构——电渗作用 多孔支持物表面可吸附电极溶液中的正离子或负离子使靠近支持物的溶液层相对带电，在电场作用下，溶液就会向一定方向移动。 凝胶支持物结构的孔隙对带电颗粒分子产生阻力。 3．缓冲溶液： ① pH值：溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度，亦即决定Q。 ② 离子强度：一般最适的离子强度在0.02～0.2之间，溶液的离子强度越高，则电泳速度越慢。 ③ 溶液粘度：迁移率与溶液粘度呈反比关系。 4．电场强度（E）： 电场强度是电