08固相膜免疫分析技术技术2015-6.ppt

Western blot （四）转印时要注意电流的大小，过高的电流产生的热量会在凝胶和NC膜之间形成气泡，从而导致转印的失败。有报道，在转印缓冲液中加入20%的甲醇，虽然降低蛋白质的洗脱效率，但可以提高其与硝酸纤维素结合的能力。或者可以在缓冲液中加入终质量分数为0.1%的SDS,也可以提高转印效率。 Western Blot 优点 高分辨率的电泳技术 特异敏感的抗原-抗体反应 1-5ng中等大小的靶蛋白 Western blot 方法学评价： 1.抗体的性质 2.IBT的灵敏度 3.IBT法在临床应用中的局限性 Western blot 应用 免疫印迹技术是蛋白质组分分析和蛋白多肽相对分子质量分析的主要方法，已广泛用于病毒蛋白和基因表达重组蛋白多肽的分析，是基因工中不可缺少的方法之一 梅毒螺旋体抗体 免疫印迹试验（IgG） 不同分子量的梅毒螺旋体抗原经电泳分开，电转移至醋酸纤维素膜上，切割后成为免疫印迹试纸条。 当稀释后的血清标本与试纸条温育于印迹槽内，如果血清标本含有抗梅毒螺旋体抗原的IgG抗体，则与免疫印迹试纸条上不同分子量的抗原结合，洗涤试纸条去除未结合的抗体，加入碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体（酶结合物），如果免疫印迹试纸条上有结合的IgG抗体，则与之结合，加入NBT/BCIP显色剂后显示结合的不同分子量抗原的条带。 梅毒螺旋体抗体 免疫印迹试验（I