低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docx

低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 中文摘要 I I I 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 中文摘要 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 中 文 摘 要 目的：以低浓度苯系物职业接触人群为研究对象，采用职业流行病学的方法和分 子生物学技术，确定有效的敏感接触标志物和效应标志物，分析苯接触剂量与遗传损 伤的剂量-反应关系，验证现行苯职业接触限值的安全性，在基因组水平筛选苯基因效 应标志物，探讨苯毒性作用的可能途径,为进一步研究苯毒性分子致癌机制提供线索。 方法：（1）应用职业流行病学方法，对接触低浓度苯系物职业人员进行作业场所 调查、健康危害调查和职业接触评估；（2）建立了高效液相色谱三重串联四级杆质谱 方法，同时测定尿中 8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG、）、反-反式粘糠酸（ttMA）、苯巯基 尿酸（S-PMA），作为接触人群的接触生物标志物；（3）应用染色体畸变率、尿 8-OHdG、 彗星试验（Olive 尾距、尾长、尾 DNA%含量）研究 120 名低浓度苯系物作业 1 年以 上人员染色体、DNA 损伤的效应指标；（4）应用全基因表达谱芯片测定 6 名苯系物 接触人员和 3 名对照组外周血淋巴细胞基因表达水平，筛选异常表达基因，并用实时 定量 PCR（RT-PCR）方法在小范围人群中验证，初步确定苯接触人员的基因生物标 志物，通过 Gene Ontology、Pathway、GenMapp 等数据库分析相关信号通路。 结果：（1）在我国现行苯系物职业接触限值水平以下，苯仍会对作业工人外周 血白细胞造成影响，遗传敏感性较高的作业工人在苯系物接触早期（接触苯 1-2 年内） 外周血白细胞已有改变。（2）在作业场所苯浓度（CTWA）0.25-5.98 mg/m3 范围内，尿 ttMA、S-PMA 与空气中苯浓度均具有良好相关性（r2=0.8759、r2=0.7497），尿 ttMA 略优于尿 S-PMA。由于敏感性高和影响因素少，可作为低浓度职业性苯接触的生物 接触标记物。（3）职业接触低浓度的苯（CTWA6mg/m3）仍然可对接触人员造成遗传 损伤，且损伤程度有随苯浓度的增高而增强的趋势；苯接触浓度与尿 8-OHdG 含量呈 一定的剂量-反应关系（P0.001、r2=0.425）；作为苯致遗传损伤的效应标志物，尿 8-OHdG 的敏感性和特异性略优于彗星发生率；混杂接触限值以内（CTWA50mg/m3） 的甲苯、二甲苯不会对苯遗传损伤产生协同或拮抗作用。（4）发现苯系物职业暴露人 群外周血淋巴细胞出现差异表达的基因 274 个，其中表达上调的基因 178 个，表达下 II II 中文摘要 低浓度苯系物接触人群遗传损伤分子标志物研究 调的基因 96 个，差异表达最显著的基因上调为 12.89 倍，下调为 16.74 倍。GO 通路 分析表明，差异表达的基因涉及核苷酸切除修复、氧化磷酸化、核糖体、内质网蛋白 加工、细胞周期等 21 条通路。在 15 名低浓度苯系物暴露、且外周血白细胞计数相对 偏低的作业工人中，TNFAIP3、CUL4A、LAIR2、PF4、GADD45A 的有效差异性被 RT-PCR 所验证，可作为潜在的苯毒性基因效应标志物。 结论： 1、在我国现行苯系物职业接触限值水平以下，苯仍会引起部分作业工人外周血 白细胞的降低，同时具有一定的遗传损伤效应。 2、本研究建立的高效液相色谱三重串联四级杆质谱法可同时测定尿中8-OHdG、 ttMA和S-PMA，其中尿8-OHdG可作为苯致遗传损伤的效应标志物，尿ttMA和S-PMA 可作为苯暴露的接触标志物。 3、特征性的差异表达基因有可能作为潜在的苯毒性基因效应标志物。 关键词：苯接触，生物标志物，基因差异表达 作 者：刘仁平 指导教师：周建华 教授 本课题受卫生部卫生行业科研专项项目：20090202006 基金资助 III III Study on Biomarkers of Genetic Damage in Occupational Workers with Low-level Benzene Exposure Abstract Study on Biomarkers of Genetic Damage in Occupational Workers with Low-level Benzene Exposure Abstract Objective The aim of this study is to determine sensitive exposure and effect biomarkers and effect markers in occupational workers ex