缝隙连接的改变在药物诱导的室性心律失常发生中的作用-内科学(心血管)专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 缝隙连接的改变在药物诱导的室性心律失常发生中的作用 华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科 博士研究生 倪明科 博士生导师 王 琳 教授 摘 要 第一部分 缝隙连接在长 QT 综合征 2 型电活动不稳定中的作用 目的：本实验应用兔楔形心肌块制备LQT2 模型，观察抗心律失常肽AAP10干预前后 模型跨室壁复极离散度(TDR)和缝隙连接蛋白磷酸化状态的变化，探讨缝隙连接(缝隙 连接)的功能改变在长QT综合征2型(LQT2)模型中电活动不稳定中的作用。 方法：应用0.5μmol/L的E-4031对兔左室楔形心肌组织块进行灌流制备LQT2模型，随 机分为正常对照组、LQT2组和抗心律失常肽(AAP10)组。采用浮置玻璃微电极法同步 记录心内膜、心外膜心肌细胞跨膜动作电位及跨室壁心电图。观察各组QT间期和跨室 壁复极离散度(TDR)的变化，通过免疫印迹和免疫荧光的方法观察缝隙连接的分布和 磷酸化状态的改变。 结果：① LQT2组QT间期较正常对照组显著延长(P0.05)，TDR较正常对照组显著增 大(P0.05)以及缝隙连接去磷酸化水平较正常对照组显著增高 (P0.01)；② AAP10组 QT间期较LQT2组显著缩短(P0.05)，TDR较LQT2组显著减小(P0.05或0.01)以及缝隙 连接去磷酸化水平较LQT2组显著降低(P0.05或0.01)；③三组的Cx43总量无明显差异 (P0.05)。 结论：抗心律失常肽能显著降低LQT2模型的TDR和缝隙连接蛋白的去磷酸化水平， 说明缝隙连接的功能改变是LQT2模型中电活动不稳定的重要因素。 关键词：缝隙连接；长QT 综合征；跨室壁离散度；抗心律常肽；缝隙连接蛋白；左 室楔型心肌组织块。 第二部分 蛋白激酶 C 激动剂致心律失常作用机制的研究 目的：观察蛋白激酶 C 激动剂佛波酯(PMA)对兔室性心律失常的影响并探讨其作用机 制。 方法：制备左室楔形心肌块灌注模型，随机分为正常组(灌流台氏液)，PMA 组(灌流 台氏液+PMA 500nmol/L)。采用浮置玻璃微电极法同步记录心内膜、心外膜心肌细胞 跨膜动作电位及跨室壁心电图，给予程序性期前刺激诱发室性心律失常(室速)的发生。 通过免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞缝隙连接蛋白 43(Cx43)总量及其 S368 位 点去磷酸化水平的变化。 结果：PMA 组与正常对照组相比 QT 间期(260±25 ms vs. 302±21ms, P 0.01)显著缩 短，Tp-e(61±13ms vs. 51±7ms, P 0.01)及 Tp-e/QT (0.24±0.05 vs. 0.17±0.02, P 0.01) 显著增大，Cx43 的总量(P0.05)及 S368 位点去磷酸化的 Cx43 水平 (P0.01) 显著减 少。PMA 组与正常组明显相比明显增加室速诱发率(70% vs. 0, P 0.05)。 结论：佛波酯(PMA)通过下调心肌缝隙连接的总量及功能从而导致心律失常的发生。 关键词：佛波酯; QT间期; 跨室壁复极离散度; 左室楔型心肌组织块; 缝隙连接。 第三部分 抗心律失常肽对蛋白激酶 C 激动剂致心律失常作用的影响 目的：观察抗心律失常肽对蛋白激酶 C 激动剂致心律失常作用的影响并探讨其作用机 制。 方法：制备左室楔形心肌块灌注模型，随机分为正常组(灌流台氏液)，佛波酯(PMA) 组 ( 灌流台氏液 +PMA 0.5um/L) ，抗心律失常肽 AAP10 组 ( 灌流台氏液 +PMA 0.5um/L+AAP10 0.5um/L)。采用浮置玻璃微电极法同步记录心内膜、心外膜心肌细胞 跨膜动作电位及跨室壁心电图，给予程序性期前刺激诱发室性心律失常(室速)的发生。 通过免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞缝隙连接蛋白 43(Cx43)总量及其 S368 位 点去磷酸化水平的变化。 结果：与正常对照组相比，PMA 组 QT 间期(260±25 ms vs. 302±21ms, P 0.01)显著 缩短，Tp-e(61±13ms vs. 51±7ms, P 0.01)及 Tp-e/QT (0.24±0.05 vs. 0.17±0.02, P 0.01) 显著增大，Cx43 的总量(P0.05)及 S368 位点去去磷酸化水平(P0.01) 显著减 少，室速诱发率(70% vs. 0% , P0.05) 明显增加。与 PMA 组相比，AAP10 组 QT 间期 (241±22ms vs. 260±24 ms, P0.05)及 S368 位点去磷酸化水平(P0.05)无明显改变， 但 Cx43 的总量(P