地西他滨增强肺腺癌细胞P15的化疗敏感性-病理学与病理生理学专业论文.docx

暨南大学硕士学位论文地西他滨增强肺腺癌细胞 暨南大学硕士学位论文 地西他滨增强肺腺癌细胞 P15 的化疗敏感性 万方数据 万方数据 中文摘要 目的：本研究为了解肺腺癌细胞 P15 的一些凋亡相关基因的甲基化情况，研究去甲基化 药物地西他滨（decitabine ，DAC）对这些凋亡相关基因的去甲基化效果，探讨使用 DAC 处理后，顺铂（cisplatin，CDDP）对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）化 疗效果是否增强。 方法：通过平板克隆实验、生长曲线实验观察 P15 细胞的生物学性状变化，测定单独使 用地西他滨，顺铂，以及两药联合使用时对细胞的平板克隆形成和生长抑制情况的影响。 TUN EL 实验检测单独使用地西他滨，顺铂，以及两药联合使用时药物作用前后肺腺癌细 胞 P15 的凋亡变化。通过甲基化特异性 PCR（Methylation-Special PCR， MSP）法，分别 设计基因的甲基化引物和非甲基化引物检测地西他滨作用于肺腺癌细胞 P15 前后的 p73、 p14ARF、p16INK4a 、bax 甲基化情况，并通过 RT-PCR 法检测地西他滨作用于肺腺癌细胞 P15 前后 p73、bcl-xL、BAD、bax、p14ARF、p16INK4a 的 mRNA 表达变化情况。 结果：平板克隆实验、生长曲线实验的结果表明，地西他滨、顺铂联合使用时 P15 细胞 的平板克隆形成数量明显降低，细胞的生长抑制率明显增加。TUNEL 实验表明，地西他 滨、顺铂联合使用时，细胞的凋亡数量显著增加，甲基化特异性 PCR 检测发现地西他滨处 理后能对 p73、p16INK4a 、bax 产生去甲基化效果，不能对 p14ARF 产生去甲基化效果。用 RT-PCR 检测发现地西他滨处理后 p73、BAD、bax、p16INK4a 的 mRNA 表达有所增加 。 bcl-xL、p14ARF 的 mRNA 表达未见增加。 结论：1.肺腺癌细胞中存在一些凋亡相关基因由于甲基化的改变而沉默，并且会影响顺铂 等化疗药物的敏感性。2.体外研究证实，地西他滨具有去甲基化效果，并且会增强顺铂对 肺腺癌细胞 P15 的化疗效果。 关键词：肺腺癌，去甲基化，地西他滨，顺铂 I Abstract Objective: To detect the methylation of apoptosis related genes on lung adenocarcinoma cell line P15 and the effect of the demethylation of decitabine (DAC) in these apoptosis related genes. We investigate the effect of combined therapy with DAC and cisplatin (CDDP) on lung adenocarcinoma cell line P15. Methods: we detected the growth inhibition by clone formation assay and growth inhibitory activities during the treatment with DAC alone ,CDDP alone or DAC followed by CDDP. TUN EL [deoxyribonucleotidyl transferase (TdT)- mediated dUTP nick end labeling] analysis was used to detect apoptosis of P15 tumor cell after treated with DAC alone ,CDDP alone or DAC followed by CDDP. We examined the change of demethylation in several apoptosis-related genes after treatment with DAC by MSP according to the methylaiton-specific primers and non- methylated primers. These genes were p73, p14ARF, p16INK4a , bax. We also examined the changes of several apoptosis-related genes in mRNA expression afte