氟对大鼠肾小管上皮细胞的毒性作用及硒干预机制的研究-动物学专业论文.docx

2.6 2.6 细胞 GSH-PX 活性22 3 讨 论24 4 结 论26 第三部分 硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡和线粒体膜电位的影响 27 1 材料和方法 27 1.1 材料 27 1.2 实验方法27 1.3 数据处理与分析 28 2 结 果29 2.1 硒对氟诱导的体外培养大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响29 2.2 硒对氟诱导的体外培养大鼠肾小管上皮细胞线粒体膜电位的影响 31 3 讨 论34 4 结 论36 第四部分 硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞 Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2 和 Bax mRNA 和蛋白表达的影响 37 1 材料和方法 37 1.1 材料 37 1.2 主要试剂的配制 38 1.3 方法 39 1.4 数据处理及分析 44 2 结 果46 2.1 硒对氟致大鼠肾小管上皮细胞凋亡相关因子 Caspase-3、Caspase-9、Bax 和 Bcl-2 mRNA 表达的影响 46 2.3 Western-blot 检测硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞中 Caspase-3、Caspase-9、 Bax 和 Bcl-2 蛋白表达的影响 49 3 讨 论52 4 结 论55 参考文献 56 致 谢71 在 在学期间承担和参与的科研课题与研究成果 72 个人简历 73 山西医科大第学硕士学位论文 山西医科大第学硕士学位论文 氟对大鼠肾小管上皮细胞的毒性作用及 硒干预机制的研究 摘 要 目的： 本课题主要以大鼠肾小管上皮细胞为研究对象，采用单氟、单硒及硒氟联合培养 细胞，旨在探讨硒对氟诱导大鼠肾小管上皮细胞的拮抗作用和相关机制的研究。 方法： 肾小管上皮细胞经不同浓度氟、硒和硒氟联合染毒培养 48 和 72 h 后，运用 MTT 法检测细胞增殖情况；观察细胞形态结构变化运用 HE 染色法；采用流式细胞仪检测 细胞凋亡和线粒体膜电位的变化；运用试剂盒检测细胞培养液中氧化应激酶的活性； Real-Time PCR 检测凋亡相关因子 Caspase-3、Caspase-9、Bax 和 Bcl-2 mRNA 表达水 平；Western-blot 免疫印迹检测 Caspase-3、Caspase-9、Bax 和 Bcl-2 蛋白表达水平。 结果： 1．染氟 48、72 和 96 h 时，染氟组 5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L 和 40 mg/L 均对 细胞增殖呈抑制作用。低浓度染硒组能够促进细胞增殖，高浓度染硒组能够抑制细胞 的增殖。与等剂量染氟组相比，硒干预组细胞增殖显著加快。 2．显微镜下观察细胞形态结构，对照组细胞生长正常，形态自然，细胞排列紧 密；染氟组细胞体积增大，细胞间隙变宽，连接不紧密，出现多核现象，异常细胞数 量增多；染硒组细胞形态与对照组大致相近；与等剂量染氟组相比，硒干预组细胞形 态趋于正常。 3．细胞培养液中氧化应激指标检测结果显示，随染氟浓度的升高，细胞培养液 中 SOD、CAT、T-AOC 和 GSH-PX 的活性逐渐降低；NO 和 MDA 含量逐渐增多。染 硒组差异不明显。与等剂量染氟组比，硒干预组中 SOD、CAT、T-AOC 和 GSH-PX 活性均升高；NO 和 MDA 含量均降低。 4．细胞凋亡和线粒体膜电位变化，随染氟浓度的升高，凋亡率升高，线粒体膜 电位降低；染硒组细胞凋亡率和线粒体膜电位无明显变化；与等剂量染氟组相比，硒 干预组细胞凋亡率显著降低，线粒体膜电位显著升高。 I II II 5．凋亡相关因子 mRNA 表达情况，随染氟浓度的升高，除 Bcl-2 mRNA 表达水 平降低外，其他凋亡因子 Caspase-3、Caspase-9 和 Bax mRNA 表达水平显著升高。与 等剂量染氟组相比，硒干预组 Bcl-2 mRNA 表达水平升高，而 Caspase-3、Caspase-9 和 Bax mRNA 表达水平都显著降低。 6．凋亡相关因子蛋白表达测定结果，与对照组比较，随染氟浓度的升高，Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 和 Bax 蛋白表达上调，而 Bcl-2 蛋白表达下调。染硒组 无统计学意义。与等剂量染氟组相比，硒干预组 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 和 Bax 蛋白表达下调，而 Bcl-2 蛋白表达上调。而各组中 pro-Caspase-3 和 pro-Caspase-9 蛋白表达没有明显变化。 结论： 1．硒对氟诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡有拮抗作用。 2．硒可以通过调节抗氧化酶活性，提高机体抗氧化能力，加快自由基的清除， 使细胞免受氧化损伤。 3．硒可以通过调节凋亡因子 Ca