钙敏感受体在戊四氮点燃慢性癫痫大鼠模型心肌细胞中的表达及作用机制-儿科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学 术 诚 信 承 诺 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作 及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得佳木斯大 学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对 本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 签名： 日期： 关于论文使用授权的说明 本人完全了解佳木斯大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文 的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 （保密的论文在解密后应遵循此规定） 签名： 导师签名： 日期： 目 录 一、摘要 1 二、Abstract 4 三、前言 6 四、文献综述 8 五、材料与方法 18 六、结果 24 七、讨论 28 八、结论 30 九、参考文献 31 十、致谢 37 十一、英文缩写 38 十二、攻读学位期间发表的学术成果 39 十三、附图 40 佳木斯大学临床医学硕士专业学位论文 摘 要 癫痫是临床上常见的慢性的神经系统疾病，主要症状是反复突然发作意识丧失伴抽 搐，严重可伴有脑水肿、心脏损害等全身各器官及系统及损伤。这是由于正常情况下脑 通过自主神经系统来调节心脏活动，神经系统功能异常时，脑对心脏的调节出现异常， 引发心脏损害，这种情况在临床上被称作脑心综合征（Brain-Heart Syndrome，BHS）。 各种引起颅内压增高的疾病均可引起脑心综合征改变（又称脑源性心脏损害），常见的 疾病有癫痫、急性颅脑损伤、急性脑血管病、颅内炎症、颅内肿瘤及其它各种颅内疾 患。据目前统计所知，引发脑心综合征的最常见病因之一是颞叶癫痫，在我国，癫痫发 病人数每年约为人口的 25.3/10 万，并且呈现上升趋势，以世界性常见、多发癫痫病为 例，其中多数病例可出现心率加快，甚至出现心脏骤停导致死亡[1，2]。因此，脑心综合 征的研究，对于临床的治疗具有重要意义。钙敏感受体（CaSR）的发现使人们认识到 Ca2+同样可以作为细胞外第一信使发挥类似激素的作用[3]。钙敏感受体( calcium-sensing receptor，CaSR) 是属于 G 蛋白偶联受体 C 家族成员，由 Brown EM 等人在 1993 年首 先从牛甲状旁腺克隆出来，随后发现甲状腺、肠道、肾脏、肝脏及中枢神经等组织及器 官中也有钙敏感受体广泛存在，2003 年 Wang 等人首次在大鼠心肌组织中发现 CaSR 表 达[4、5]。研究表明，CaSR 可以识别细胞外 Ca2+的细微变化，并保证时刻调节细胞内钙 的稳态，同时在维持机体 Ca2＋稳态和其它金属离子稳态中发挥关键作用，并且参与调 节激素分泌，细胞增殖、分化、凋亡、基因表达，离子通道开放等过程［6］。2012 年， 郭津[7]人等证实， CaSR 参与了大鼠心肌缺血/再灌注损伤、 心肌肥大的发生[8]。目 前，癫痫大鼠心肌细胞中 CaSR 表达及其作用通路情况尚未见报道。本实验通过观察戊 四氮诱导的慢性癫痫大鼠模型的心肌细胞中 CaSR 表达，证明癫痫大鼠心肌细胞中有 CaSR 表达及其在细胞凋亡中与线粒体的关系。 方法 清洁级雄性 Wistar 大鼠，体重 180±10 克，哈尔滨医科大学动物实验室提 供。随机分为正常组( control group，n=12)，癫痫组( epilepsy group，n=12)。癫痫组采用 连续 28 天腹腔注射亚惊厥剂量戊四氮生理盐水注射液 35mg / kg.d（pentetrazole PTZ)，建立慢性癫痫大鼠模型。注射后观察抽搐发作情况，记录癫痫发作的级别、发作 潜伏期 (s) (即注入 PTZ 到首次痫性发作之间经历的时间)及发作持续时间 (s)，凡出 - 1 - 现Ⅲ级以上痫性发作的大鼠为模型制备成功（癫痫大鼠行为分级按 Racine 分级法）。 脑电图检测大脑异常放电情况。心脏彩超检测心率、左心室缩短分数和左室射血分数。 采用德国临床化学学会（DGKC）推荐法检测血清肌酸激酶(CK)、血清肌酸激酶同工酶 （CK-MB）。HE 染色观察心肌形态学变化；电镜观察心脏超微结构变化。Western bloting 分别观察心肌 CaSR、Bcl-2、Caspase3 和 Bax 的蛋白表达情况。 结果 脑电检查正常组未见异常变化，癫痫组脑电图可见明显节律失调，可见尖 波及棘波改变，提示癫痫组造模成功。经胸高频超声心动图能清晰显示大鼠的左室长轴 切面， 正常组心率 348 次/分，M 型曲线显示左室壁节律规整，癫痫组大鼠心率 461 次 /分，M 型曲线显示左室壁