低氧诱导的ER应激及上皮间质转化在人肝细胞癌中作用的初步研究-神经生物学专业论文.docx

万方数据 万方数据 学位论文独创性声明 本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人 已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中作了明确说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学校有权保 留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权 允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行 检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交《中 国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》和《中国 学位论文全文数据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体形式 公开出版，并同意编入 CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文 评价数据库》中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。 学位论文作者签名： 导师签名： 日期： 日期： 目录 HYPERLINK \l _bookmark0 英文缩略词表（Abbreviation） 1 HYPERLINK \l _bookmark1 中文摘要 4 HYPERLINK \l _bookmark2 英文摘要 7 HYPERLINK \l _bookmark3 1. 前言 10 HYPERLINK \l _bookmark4 2. 实验材料 12 HYPERLINK \l _bookmark5 2.1 细胞株、菌株 12 HYPERLINK \l _bookmark6 2.2 质粒 12 HYPERLINK \l _bookmark7 2.3 抗体 13 HYPERLINK \l _bookmark8 2.4 主要实验试剂 13 HYPERLINK \l _bookmark9 2.5 PCR 引物的设计及合成 13 HYPERLINK \l _bookmark10 2.6 仪器设备 14 HYPERLINK \l _bookmark11 3. 实验方法 16 HYPERLINK \l _bookmark12 3.1 实验主要试剂的配制方法 16 HYPERLINK \l _bookmark13 3.2 质粒小抽 19 HYPERLINK \l _bookmark14 3.3 质粒大抽 20 HYPERLINK \l _bookmark15 3.4 石蜡切片免疫组织化学 22 HYPERLINK \l _bookmark16 3.5 石蜡切片免疫荧光 23 HYPERLINK \l _bookmark17 3.6 细胞免疫荧光 24 HYPERLINK \l _bookmark18 3.7 蛋白质免疫印迹（Immune Blot,IB） 25 HYPERLINK \l _bookmark19 3.7.1 蛋白样品的制备 25 HYPERLINK \l _bookmark20 3.7.2 SDS的胶的预制 25 HYPERLINK \l _bookmark21 3.7.3 蛋白上样及电泳 26 HYPERLINK \l _bookmark22 3.7.4 转膜 26 HYPERLINK \l _bookmark23 3.7.5 孵育抗体及 IB 检测 27 HYPERLINK \l _bookmark24 3.8 质粒的构建 27 HYPERLINK \l _bookmark25 3.8.1 引物的设计 27 HYPERLINK \l _bookmark26 3.8.2 细胞 RNA 的提取 28 HYPERLINK \l _bookmark27 3.8.3 扩增目的片段 29 HYPERLINK \l _bookmark28 3.8.4 凝胶电泳及胶回收 30 HYPERLINK \l _bookmark29 3.8.5 目的片段的酶切及连接 31 HYPERLINK \l _bookmark30 3.8.6 转化及摇菌 32 HYPERLINK \l _bookmark31 3.8.7 质粒酶切鉴定 32 HYPERLINK \l _bookmark32 3.9 细胞核浆蛋白分离 33 HYPERLINK \l _bookmark33 3.10 细胞培养以及转染 34 HYPERLINK \l _bookmark34 3.11 实验数据统计学分析 34 HYPERLINK \l _bookmark35 4. 实验结果 35 HYPERLINK \l _bookmark36