蠲痹颗粒对胶原性小鼠关节炎抑制作用与机制分析.pdfVIP

蠲痹颗粒对胶原性关节炎小鼠抑制作用及机制研究 6年，在云南省中医医疗集团 药制字)。在我院临床使用1 54家医院推广应用6年余，显示了良好的临床疗效，且未发现明显毒副 作用，倍受广大RA患者欢迎。然而蠲痹颗粒治疗RA主要作用机理尚未 阐明，有必要进行深入研究。 本课题主要以T细胞亚群平衡为切入点，在人类RA的经典动物模型 一牛II型胶原诱导的DBA／1小鼠关节炎上，探讨蠲痹颗粒通过影响Th细 胞亚群间平衡而介导治疗类风湿关节炎的分子机制，以期揭示“温阳散 寒除湿法治疗痹证(风寒湿痹)”理论的现代生物学特征及内在规律，阐 明著名中医学家吴佩衡及学术继承人云南省名老中医一吴生元教授应用 扶阳理论治疗痹证临床中药优效的科学基础，为推动蠲痹颗粒进一步研 究奠定扎实的基础。 材料、方法与结果 材料、方法与结果 1实验材料 1-1动物 BALB／c纯系小鼠，雌性，1 8—209，成都达硕生物科技有限公提供，合 格证号：SCXK()I 成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK(川)2008．24。动物均 饲养在云南省中医中药研究院SPF级动物房，实验动物至少饲养一周后 使用。温度22+1℃，湿度55士5％，12小时光暗循环；饲料和水均在消毒 后由动物自由摄取；所有实验均严格按照实验动物有关条例进行。 1．2主要药物及试剂 蠲痹颗粒(浸膏每克含生药量为1．14克)，云南中医学院第一附属医 院制剂中心提供：丙酮、橄榄油购白天津化学试剂有限公司，批号： 醋酸，购白天津市风船化学试剂科技有限公司，批号： bovine 胎牛血清(fetal USA)；RPMI一1640培养基，购自GibcoBRL公司(1ifeTechnologies， 国科学院上海原子核研究所；IFN．Y、IL．10细胞因子ELISA检测试剂盒， 购自BD PharMingen公司fSan 苏木精．伊红(HE)、福尔马林购自国药集团化学试剂有限公司；甲氨蝶 1 呤片(MTX)，上海信宜药厂，国药准字H3020644，规格：2．5mg／片。 1．3主要仪器 YLS．Q4耳肿打耳器购自山东省医学科学设备站：离心机购自上海手 10； 术器械厂，型号：80．1；天平德国Sartorius电子天平，型号：BP3 3—30K：石 F200／M200；德国Sigma高速台式冷冻离心机，型号：Sigma SouthernProduct 蜡切片机，厂家：Shandon Ltd．；BM．Will生物组织包埋机， 冷冻台，CS．VI型摊片烤片机，TS．12G生物组织自动脱水机厂家：湖北 蠲痹颗粒对胶原性关节炎小鼠抑制作用及桃制研究 BX5 省医用电子仪器厂；OLYMPUS1显微镜，厂家：同本奥林巴斯有限 公司；Moticam显微镜摄像头，厂家：上海新振仪器设备有限公司； BCD—l 90W容声冰箱，厂家：广东科龙电器股份有限公司。 2实验方法 2．1蠲痹颗粒对小鼠迟发型超敏反应免疫抑制作用的研究 2．1．1试验方法及评价 取体重18．20克的BALB／c纯系雌性小鼠，随机分组，将丙酮：橄 在小鼠的每只后腿上致敏；第一次致敏后的第5天，用0．2％DNFB溶液 涂抹在小鼠左耳两侧进行免疫攻击。右耳单涂丙酮：橄榄油(4：1)溶 剂作为对照；实验共设3个组，每组10只，即模型对照组(溶剂对照)， 阳性对照组(霉酚酸酯1mg／kg)，蠲痹颗粒给药组(蠲痹颗粒浸膏1．899／kg， 免疫攻击后24小时用打孔机打下小鼠左、右耳片称重，计算出两耳的重 旦些